复合贻贝蛋白Mefp-5水凝胶的制备、表征及其生物效能

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目的:制备浓度配比最优的复合贻贝蛋白Mefp-5水凝胶,并研究其生物相容性;探讨复合贻贝蛋白Mefp-5水凝胶促骨修复的作用效果及机制。方法:采用基因工程方法制备出贻贝蛋白Mefp-5,以Mefp-5为载负药物,以透明质酸钠水凝胶为载体,采用物理交联的方法制备复合贻贝蛋白Mefp-5水凝胶。扫描电镜观察复合贻贝蛋白Mefp-5水凝胶结构、测定体外降解率等方法,研究不同浓度配比复合贻贝蛋白Mefp-5水凝胶表征情况,制备出最优的复合水凝胶。体外细胞培养观察细胞形貌,检测OD值和碱性磷酸酶(ALP)活性,研究各材料生物相容性。制作96例小鼠股骨下端骨缺损模型,随机将96只实验小鼠分组为16组,每组6只小鼠,分别在特定时间将小鼠猝死,采集标本,对各组标本行Mrico CT检查、HE染色、Masson染色,经数据分析、组织学评估各材料对骨缺损的治疗效果。结果:不同浓度配比的复合贻贝蛋白Mefp-5水凝胶内部存在直径不一孔隙,表面凹凸不平,且随浓度增加,表面凹凸不平越严重。不同浓度配比的复合贻贝蛋白Mefp-5水凝胶体外降解率,差异具有统计学意义(P<0.05),而10 mg/ml复合贻贝蛋白Mefp-5水凝胶更符合小鼠骨修复周期,被选为研究对象。体外细胞培养,显示细胞形态正常、未出现大面积死亡,且Mefp-5组、Mefp-5-HA组OD值、碱性磷酸酶(ALP)活性明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。动物实验的Mrico CT数据分析显示:Mefp-5组、Mefp-5-HA组BMD增加明显,差异具有统计学意义(P<0.01)。Mefp-5组、Mefp-5-HA组骨修复时间缩短,差异具有统计学意义(P<0.001)。HE染色、Masson染色显示:Mefp-5组、Mefp-5-HA组成骨细胞聚集、骨基质分泌较多,可见多量的胶原纤维形成。结论:(1)10 mg/ml复合贻贝蛋白Mefp-5水凝胶的浓度配比最优。(2)实验组材料具有良好的细胞相容性、能促进MC3T3-E1细胞增殖、分化。(3)小鼠股骨干骺端骨缺损模型制作方法简单、创伤小、重复性好,是理想的、简便的小鼠股骨缺损模型制备方法。(4)Mefp-5、Mefp-5-HA能促进骨修复。
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