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研究背景及目的:Epstein-Barr病毒(Epstein-Barr virus,EBV),也称作人类疱疹病毒4型(human herpesvirus 4,HHV-4),是一种双链DNA疱疹病毒,属于嗜淋巴细胞属。能在细胞内增殖并建立有效的潜伏感染而很难从体内清除,并能引起多种癌症以及其它非恶性肿瘤病毒病。现在已经知道的,EB病毒与以下几种疾病有关,如传染性单核细胞增多症、伯基特淋巴瘤(Burkitt淋巴瘤)、非洲儿童淋巴瘤、鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)和多克隆B细胞淋巴瘤等。目前临床上所使用的治疗EBV相关疾病的抗病毒药物主要是阿昔洛韦和更昔洛韦,这两者均是作用于病毒DNA复制,但同时也影响着人正常细胞DNA的复制,有着比较大的毒副作用,并且容易使人体细胞产生耐药性突变,而且对于一些特殊症状如免疫缺陷患者无效,临床效果并不理想。因此,探索发现新型的毒副作用小的能够特异性靶向病毒表达的小分子抑制剂有着重要的临床意义。黄芩素(Baicalein)是从中国传统中草药黄芩的根部所提取的一类含有黄酮类活性物质的小分子化合物,许多研究表明,黄芩素对于人类的多种肿瘤细胞增殖都有一定程度的抑制作用。本论文研究了 Baicalein对于EBV阳性的鼻咽癌的作用效果及对其作用机制的初步探索。方法:使用CCK-8(Cell Counting Kit-8)细胞活性检测试剂盒和细胞克隆形成实验(Cell Colony Fomation)检测baicalein在不同浓度梯度和时间梯度下对EBV阳性的鼻咽癌细胞HONE1/Akata、HK1/Akata和C666-1和人肾小管正常上皮细胞HK-2的毒性作用。使用流式细胞仪技术和hoechst 33258细胞染色方法检测Baicalein阻滞细胞周期及引起细胞凋亡的情况。用Western blot技术检测EBV阳性的鼻咽癌细胞在受到一定浓度梯度的Baicalein药物处理后,目的蛋白表达水平的变化。使用Real-time PCR技术检测HONE1/Akata和HK1/Akata细胞受不同浓度的Baicalein处理后,EBV核抗原1(EB nuclear antigen 1,EBNA1)和转录因子Sp1的mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因实验技术(Dual luciferase reporter assay),探索不同浓度条件下的Baicalein对EBNA1启动子Qp的活性是否有相关性调控。使用瞬时转染技术使EBNA1在HONE1/Akata和HK1/Akata细胞中过表达,检测其表达水平是否受到黄芩素影响。裸鼠(BALB/cnudemice)使用HONE1/Akata细胞致瘤后,使用Baicalein处理裸鼠,观察体内肿瘤生长情况,肿瘤中EBNA1蛋白和mRNA表达水平。结果:Baicalein能够明显抑制HONE1/Akata和HK1/Akata的细胞活性;Baicalein降低HONE1/Akata和HK1/Akata细胞中EBNA1的蛋白表达水平,而对EBV阴性细胞系HK2的表达没有显著影响;Baicalein降低HONE1/Akata和HK1/Akata细胞中EBNA1的mRNA表达水平;Baicalein可以引发EBV阳性鼻咽癌细胞的周期阻滞并且诱导细胞凋亡;过表达的EBNA1能够减弱Baicalein对于HONE1/Akata和HK1/Akata细胞活性的影响;Baicalein降低EBNA1启动子Qp的活性;Baicalein能体内抑制裸鼠/HONE1/Akata肿瘤的生长。结论和意义:这项课题表明Baicalein可以通过下调EBV重要病毒蛋白EBNA1的表达在体外或者体内抑制EBV阳性鼻咽癌细胞的增殖生长,这些研究将有助于明确黄芩素是否可以作为治疗EBV相关疾病的新型靶向性小分子化合物新药前体,对于开辟治疗病毒引起的恶性肿瘤以及其他传染性、高致病力病毒性疾病具有重要的理论意义和实际应用价值。