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BACE1抑制剂的活性评价和作用模式研究需要大量活性良好的BACE1。商品BACE1成本很高，因此需要利用原核或真核表达系统大量制备BACE1。为此本研究分别构建了携带proBACE1和BACE1编码序列的分泌型毕赤酵母重组表达质粒pPIC9K-MetBACE22和pPIC9K-MetBACE46，以及携带proBACE1编码序列的大肠杆菌重组表达质粒pET-32a-MetBACE22，用于表达proBACE1和BACE1重组蛋白。结果显示大肠杆菌表达的重组proBACE1无活性，而转入proBACE1基因的重组毕赤酵母9k-B22的发酵液上清活性明显高于转入成熟型BACE1基因的重组菌株9k-B46的发酵液上清活性。SDS-PAGE/高碘酸-希夫试剂染色发现纯化得到的proBACE1是被高度糖基化的蛋白（在SDS-PAGE上表现为85 kD为中心的分散条带），其糖基化可以被糖苷内切酶Endo Hf完全切除，得到50kD左右的两条蛋白带。使用肽质量指纹图谱鉴定发现，分子量较高的条带与proBACE1匹配，而另外一条与BACE1匹配。这说明proBACE1可以在毕赤酵母中加工为成熟型。本研究还发现纯化的proBACE1存在一定程度的自催化现象，导致42 kD和39kD两条蛋白带的出现。活性检测发现糖基化BACE1和去糖基化BACE1的活性均低于HEK293细胞（人胚肾细胞）表达的商品BACE1，去除糖基化后活性降低了40％，这说明糖基化及其类型对BACE1活性非常重要。本课题组以前分离得到的BACE1抑制剂AV-4-1对糖基化BACE1、去糖基化BACE1以及商品BACE1的抑制率无显著差异，这说明糖基化并不影响与抑制剂的相互作用。经过一系列培养条件优化（培养基pH、甲醇浓度、接种量、酸水解酪蛋白含量、培养温度以及瓶塞类型等），BACE1表达量有一定提高，约为1 mg/L。为下一步测定BACE1非竞争性抑制剂作用模式奠定了物质基础。