乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，复发转移是导致乳腺癌治疗失败、病人死亡的主要原因。发生远处转移的乳腺癌患者其5年生存率仅为23％。导致如此低存活率的主要原因是因为人们对乳腺癌的生物学特性、肿瘤进展的原因缺乏深入的了解，并对肿瘤的侵袭/转移缺乏直接有效的治疗手段。因此，进一步探索乳腺癌侵袭转移的机制、寻找新的治疗方法就显得尤为重要。赖氨酰氧化酶(lysyloxidase，LOX)是控制胶原蛋白和弹力蛋白、稳定细胞外基质的关键酶，LOX活性的增加可导致组织器官的纤维变性。最新的研究发现LOX还具有一些新的功能，包括调节细胞黏附、运动及基因的转录等。目前认为LOX及MMPs均与乳腺癌的侵袭性转移密切相关，而且二者均作用于细胞外基质，其作用机理是否具有一定的关联性?目前缺乏对其之间相关性的研究。　　目的:①探讨LOX基因在低侵袭/转移性乳腺癌细胞MCF-7和高侵袭/转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231的表达差异，siRNA干扰高侵袭/转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231的LOX基因表达后侵袭和增殖性变化;②构建慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)及对乳腺癌细胞增殖活性的影响;③观察转染了病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)干扰高侵袭/转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231的LOX基因表达后在乳腺癌裸鼠原位移植模型的成瘤及转移情况;④LOX在人乳腺癌组织、正常组织及乳腺良性病变组织中的表达，与MMP-2、MMP-9及乳腺癌临床病理学指标（患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移与否、临床分期、ER、PR及Her-2）的关系。　　方法:①RT-PCR扩增低侵袭/转移性乳腺癌细胞MCF-7和高侵袭/转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231 LOX基因，测序确认，荧光定量RT-PCR的SYBR GreenⅠ荧光嵌合法相对定量两种细胞的LOX基因表达。设计合成LOX基因siRNA干扰片段，瞬转高表达LOX基因的乳腺癌细胞，半定量RT-PCR、Real time PCR、细胞免疫荧光检测干扰效率，筛选出干扰效果最明显的一对siRNA，设空白对照组(未转染组，Con)，阴性对照组(转染无效用dsRNA组，Mock)和实验组(RNAi干扰组)每组设两个平行孔，于转然后24小时、48小时、72小时进行Transwell小室、划痕实验和CCK-8细胞增殖实验，观察干扰LOX基因表达后对乳腺癌细胞侵袭和增殖的生物学行为的影响。②构建慢病毒干扰载体LOX-RNAi-LV，转染乳腺癌细胞MDA-MB-231，与阴性对照组(GFP-NC-LV)及空白对照组进行比较;MTT法观察3组细胞增殖能力;荧光定量RT-PCR检测3组细胞的LOX、MMP-2、MMP-9、HIF-1α及Ki-67的mRNA表达。③60只裸鼠随机分为3组，每组20只，于每组裸鼠的乳腺脂肪垫内分别以5×106细胞数量接种LOX基因高表达的乳腺癌细胞株MDA-MB-231、LOX基因低表达的MCF-7细胞及LOX基因被干扰的MDA-MB-231细胞，建立乳腺癌裸鼠原位移植模型。6周后测定移植肿瘤的生长及转移，免疫组织化学技术检测移植瘤中LOX、MMP-2、MMP-9及HIF-1α蛋白的表达情况。④RT-PCR检测110例乳腺癌组织、正常乳腺组织及20例乳腺良性病变组织中LOXmRNA的表达，免疫组化检测111例乳腺癌组织、正常乳腺组织及20例乳腺良性病变组织中LOX、MMP-2、MMP-9、ER、PR及Her-2的表达，分析LOX与临床病理资料（患者年龄、临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移情况）之间的关系。　　结果:①扩增出LOX基因，测序结果与目的基因序列相符，荧光定量2-△△CT方法分析MCF-7和MDA-MB-231细胞的LOX基因相对表达差异，MDA-MB-231高表达LOX基因。瞬时转染化学合成的LOX siRNA后，MDA-MB-231细胞中LOX mRNA在转染48h表达下降明显。干扰LOX表达后，体外运动实验(Transwell)结果显示RNAi组、Mock组和Con组中MDA-MB-231细胞穿过微孔滤膜到达下室面的细胞数分别为50±2、48±4和30±1;转染48h后的划痕实验0h、6h、12h和24h图片和迁移距离显示RNAi组较Mock组和Con组迁徙运动能力明显减弱。CCK-8细胞增殖实验，RNAi组在转染后24h、48h、72h和96h的生长抑制率分别为30.5％、40.8％、50.4％和36.95％，Mock组和Con组细胞生长未受到明显抑制，RNAi组较Mock组和Con组细胞增殖明显抑制（P＜0.05）。②慢病毒转染MDA-MB-231后，约48-60h有GFP表达，72h后表达明显增强;慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染LOX siRNA后，MDA-MB-231细胞的LOX的表达受到明显抑制（0.108±0.013），与空白组(1.000±0.000)和阴性对照组(0.855±0.008)比较有显著性差异(P＜0.05);干扰组(LOX-RNAi-LV)48h后细胞生长增殖较空白对照组和阴性对照组明显降低，差异有统计学意义(P=0.000);干扰组(LOX-RNAi-LV) MMP-2、MMP-9及Ki-67表达与阴性对照组比较均有显著性差异(P＜0.05)。③裸鼠接种乳腺癌细胞后第6d均有肿瘤形成，至6周时MDA-MB-231组的肿瘤平均体积(400.15±79.81mm3)和肿瘤平均重量（0.433±0.068g）显著大于MCF-7组(111.34±24.13mm3、0.118±0.021g)和LOX基因干扰组(108.89±26.61 mm3、0.117±0.021g)，差异有统计学意义(P＜0.01)，且MDA-MB-231组有3只裸鼠出现肺转移;MDA-MB-231组LOX、MMP-2、MMP-9及HIF-1α蛋白表达水平明显高于LOX基因干扰组及MCF-7组;相关分析显示，LOX蛋白与MMP-2(r=0.696，P=0.000)、MMP-9(r=0.735，P=0.000)、HIF-1a(r=0.737，P=0.000)蛋白呈显著正相关。④LOX mRNA在111例乳腺癌组织、正常乳腺组织及20例乳腺良性病变组织中的表达率分别为57.65％、31.53％、25.00％，乳腺癌组织中LOXmRNA的表达率明显高于正常乳腺组织及乳腺良性病变组织(P＜0.01)。LOX mRNA在不同的肿瘤大小(P=0.023)、临床分期(P=0.001)及淋巴结转移(P=0.013)的表达率均存在着显著的差异;LOX蛋白在乳腺癌、正常乳腺组织及乳腺良性病变组织中的表达率分别为48.64％、26.13％、20.00％，乳腺癌组织中LOX蛋白的表达率明显高于正常乳腺组织及乳腺良性病变组织(P=0.019)。LOX蛋白在不同肿瘤大小(P=0.021)、临床分期(P=0.005)和淋巴结转移(P=0.042)的表达率存在显著差异。相关分析显示，LOX蛋白表达与MMP-2（r=0.262，P=0.005）、MMP-9（r=0.424，P=0.000）、ki67(r=0.367，P=0.005)及HIF-1α（r=0.368，P=0.005）蛋白之间呈显著正相关，而与ER(r=0.257，P=0.007)、PR(r=-0.276，P=0.003)、HER-2（r=-0.225，P=0.017）蛋白呈显著负相关。　　结论:①高侵袭/转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231高表达LOX基因，干扰MDA-MB-231细胞LOX基因表达后细胞的生长增殖及侵袭转移能力明显减弱;②LOX过表达的乳腺癌其细胞增殖能力更强，恶性程度更高，更容易发生远处转移，LOX过表达可能是导致乳腺癌具有侵袭性和发生转移的重要因素之一;③LOX表达水平与MMP-2、MMP-9呈正相关，二者相互间可能具有协同促进作用，共同作用于ECM，促进了乳腺癌的侵袭转移;④低氧环境可能具有促进或上调LOX和MMP的表达的作用。