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手足口病(hand，foot and mouth disease，HFMD)是一种在全球范围内流行的急性传染病，近几年来，其在亚太地区的爆发尤为严重。在我国，手足口病已成为危害婴幼儿健康的重要公共卫生问题。 柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16，CA16)和肠道病毒71型(Enterovirus71，EV71)是引起手足口病的主要病原体。一直以来，研究人员把工作重点放在了致病率和致死率更高的EV71上，而目前越来越多的研究表明CA16的感染也是导致重症及死亡病例的重要因素之一。但是目前还没有针对CA16引起的手足口病的特效治疗方案和预防手段。疫苗是控制手足口病的关键，本研究对CA16候选株减毒特性和生产工艺进行初步的研究，旨在为其减毒疫苗的开发奠定基础。 实验将两株CA16高免疫原性的毒株经过连续低温传代减毒后，进行减毒特性的评价，结果发现33℃连续低温传代后毒株表现出以下特性(1)减毒候选株保持稳定的生长特性，低温传至第11代次后KM154株的感染性滴度波动范围小于0.5LgCCID50/ml;(2)减毒候选株具有良好的免疫原性，以病毒收获液0.5ml/只的剂量腹腔注射免疫成鼠后以抗体效价大于1∶4为阳性，其抗体阳转率达100％，从抗体几何平均滴度(Genometric Mean Titer，GMT)来看，最高可达1∶30;(3)减毒候选株的致病性研究中发现随着代次的升高减毒株对乳鼠的致病力减弱，KM154毒株的第12代次(KP12)后感染的乳鼠未见发病及死亡情况，组织中能检测到CA16病毒，但无明显的病理改变;(4)减毒候选株基因序列检测结果发现，与初始代次相比，毒株基本保持了遗传的稳定性;(5)交叉保护研究结果显示，候选株免疫兔后制成的兔抗-CA16血清对所选的14株CA16毒株具有100％的保护作用，而15株EV71株只有一株受保护;(6)在感染了两个减毒候选株的ICR成鼠（腹腔注射）及乳鼠（颅内注射）的脑、脾、肾、肺、肝、心、肌肉、脊髓组织中检测到CA16病毒，表明病毒能在乳鼠及成鼠组织内复制并传播。 本研究还对生产工艺进行了初步的探讨。(1)在毒株稳定性影响因素的研究中我们发现，10次以内的冻融次数对CA16毒株的感染性滴度无影响;毒株在-70℃与液氮中储存8个月后，两个条件下的毒株感染性滴度相同，均为6.58LgCCID50/ml，与原始相比，基本没有下降;(2)加入MgCl2和我所甲肝无明胶的冻干保护剂后毒株的感染性滴度下降速率明显减缓，加入0.5 M MgCl2组至第7天只下降了1.4LgCCID50/ml。(3)不同纯化工艺的探讨中我们发现氯仿抽提对病毒的感染性滴度及抗原含量回收率都较好，且刺激小鼠产生有效的抗体水平，是较理想的病毒纯化方法;实验还发现蛋白质含量及减毒株感染性滴度对毒株的免疫原性都有影响，蛋白质含量及感染性滴度高的毒株免疫原性好。 本研究获得了具有稳定生长特性、良好免疫原性和遗传稳定性，且拥有对CA16广谱保护作用的CA16减毒候选株，并对毒株热稳定性、纯化方法等生产工艺进行了初步摸索，为CA16减毒活疫苗的研发及生产奠定了良好的实验基础。