纤细裸藻副淀粉的制备及其对RAW264.7巨噬细胞的免疫激活研究

来源 :深圳大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xinran200391127
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纤细裸藻(Euglena gracilis)富含副淀粉,是一种新型的保健食品。副淀粉具有降低胆固醇、降低血糖、抗病原微生物、抗肿瘤、保护肝脏和免疫调节等多种生物活性,有望开发成营养保健品或免疫佐剂。然而副淀粉的免疫调节机制尚未明确,极大地制约了副淀粉的开发应用。本论文以超声和碱化的方法制备裸藻副淀粉,探究其对RAW264.7巨噬细胞的免疫激活效果及机制,主要内容及结构如下:(1)优化了裸藻副淀粉的制备流程。比较了超声破碎和均质破碎裸藻细胞提取副淀粉的效果,结果表明超声破碎的效果明显比均质机好,副淀粉获取量提高了40%。还发现用EG培养基比EM+Et OH培养基培养纤细裸藻能获得更高的副淀粉含量和总量(含量和总量分别提高了55%和181%)。而且,碱化处理的副淀粉溶液可增加溶解度和生物利用率。提取的副淀粉颗粒经激光共聚焦拉曼光谱仪鉴定确认。(2)进一步探究了超声和碱化制备的裸藻副淀粉对RAW264.7巨噬细胞的免疫激活作用及分子机制。发现副淀粉能有效促进RAW264.7巨噬细胞中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)等免疫介质的生成,并上调诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的表达,且与浓度成正相关。深入分析发现,副淀粉能够显著激活RAW264.7巨噬细胞中核转录因子(nuclear factor-kappa B,NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路。通过共聚焦显微镜观察到NF-κB/p65亚基的核易位,并且NF-κB和MAPK信号通路的特定抑制剂减少了上述免疫介质的分泌,从而验证了NF-κB和MAPK信号通路的激活。综上所述,超声和碱化制备的裸藻副淀粉具有免疫调节活性,研究结果为纤细裸藻副淀粉作为药物和健康食品的开发应用提供了重要的理论依据。
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