贡菊(Dendranthema morifolium (Ramat) Tzvel. cv. Gongju)为菊科(Compositae)多年生草本植物,又名“贡菊”、“徽菊”,以头状花序入药,为我国药典规定药用菊花来源之一。贡菊性微寒,味甘苦,具疏风清热,平肝明目,清热解毒之功效,临床上常用于风热感冒,头痛眩晕,目赤肿痛,疮痈肿毒等,临床制剂有枸橘地黄丸、三宝片等。贡菊药食同源,常被开发为高级茶饮、保健品,具有广阔市场前景。黄山贡菊引种到广东粤东地区惠州、梅州等地种植,经过多年的驯化栽培,形成了适应广东气候条件的生态类型。但贡菊有性生殖败育,不能结实,故没有种子。生产上一直采用分株、扦插等无性繁殖方式育苗,不仅繁殖系数低,成本高,且贡菊具有严重的连作障碍,多代分殖易于引发植株病毒积累、产量下降,种质严重退化或变异。因此,本课题组受企业的委托,对广东省梅州地区种植的贡菊开展脱毒处理、种质复壮以及种苗生产的研究。本研究内容是在课题组前期开展离体快繁体系研究的工作基础上,对原有的离体快繁体系优化进行优化研究,同时,以贡菊组培苗为母本,大量扩繁生产用苗,对基地生产的贡菊种苗开展分级标准研究。目的：优化贡菊离体快繁体系,探讨贡菊离体快繁最适宜条件,对贡菊种质资源进行复壮,为加快贡菊良种繁育提供理论方法及依据；同时建立科学的贡菊种苗分级标准,为保护贡菊种质资源、优良种苗的选取培育和规范化种植奠定基础。方法：本实验在课题组研究成果基础上开展,研究内容主要包括以下几方面：通过对植物生长调节剂种类和浓度、基本培养基的配方、接种方式、接种疏密度、有机添加物的选择等几个方面进行考察,以达到优化贡菊离体快繁条件的目的；通过对贡菊种苗质量各项生物指标进行统计学分析及研究,提出合理的贡菊种苗的分级标准并后期进行分级验证。本研究采用了单因素实验、正交设计、聚类分析等方法进行研究。结果：1.贡菊不定芽离体诱导增殖条件的优化1.1取材部位和接种密度的筛选：与叶片、茎段上端、茎段下端、组织薄层切片相比,顶芽更适用于作为贡菊不定芽诱导增殖的取材部位；最优接种密度为3株／瓶。1.2植物生长调节剂的选择：6-BA与KT在一定浓度范围内对不定芽诱导均有作用；添加生长素NAA或IBA均可提高不定芽诱导率；最佳的增值条件为：6-BA2.0mg·L-1+NAA0.02 mg·L-1+IBA0.1 mg·L-1,增殖系数高达6.43±0.56。1.3基本培养基的优化：在标准MS大量元素浓度、1.5倍MS标准铁盐浓度、20～30g.L-1蔗糖及添加30 m1.L-1椰子汁条件下,诱导增至不定芽效果最佳。2.贡菊离体壮苗生根及炼苗移栽条件的优化通过单因素、组合实验等方法,获得最适于贡菊离体壮苗的最优激素培养条件为MS+IBA0.1 mg·L-1+NAA0.2mg·L-1;最适宜接种密度为5株／瓶；最适于贡菊离体壮苗的碳源为蔗糖；添加250～500mg.L-1的水解酪蛋白可明显促进贡菊芽苗生长；适宜贡菊生根的活性炭浓度在0～1g.L-1范围内,以AC0.5g.L-1处理生根率最优。适宜的炼苗基质为珍珠岩：最适于贡菊炼苗的混合基质为：蛭石：河沙：园土=1：1：1。3.贡菊种苗分级标准的建立贡菊种苗的分级标准为：Ⅰ级：H≥9.26cm,D≥0.30cm:Ⅱ级：H(9.26>H≥6.56), D(0.30>D≥0.21)；Ⅲ级苗的临界值为H<6.56cm,D<0.21cm.Ⅰ、Ⅱ级苗为合格苗,达到出圃的要求,种植时优先选择Ⅰ、Ⅱ级种苗。结论：本研究在课题组前期成果基础上,对不同植物生长调节剂种类和浓度、接种疏密度、有机添加物的选择等几个方面进行考察,并结合培养效果及节约成本进行效果评价,获得优化的贡菊离体快繁体系,为加快贡菊良种繁育、促进优质种苗规范化生产奠定基础。通过对贡菊种苗质量各项生物指标进行统计学分析,结果发现株高及地径可作为贡菊种苗的分级指标,通过聚类分析将贡菊种苗质量分为三个级别,并通过后期对各等级种苗的成活率、产量等指标进行考察,验证了该分级标准合理、可行,可为贡菊规模化和规范化生产提供一定的参考依据。