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水稻雄性不育突变体是杂交水稻的重要遗传资源,对研究水稻花粉的发育机制有着重要的理论意义。另一方面,水稻非洲栽培稻与亚洲栽培稻间杂种具有强大的杂种优势,但是杂种不育限制了种间杂种不育优势的有效利用。克隆杂种不育基因并阐述其不育机理对克服杂种不育有着重要的意义。因此分离克隆水稻雄性不育基因和杂种不育基因,对研究水稻花粉发育的机制以及实现水稻种间杂种优势利用,都有着十分重要的理论和实践意义。 本论文包括两部分的内容,其一是对两个在组织培养中得到的体细胞变异的雄性不育突变体(Male Sterility1)MS1和(Male Sterility2)MS2进行遗传分子分析,并对其突变体位点进行了定位;其二是对种间杂种不育S1座位的候选基因进行功能互补实验。 对水稻雄性不育突变体MS1和MS2的分子遗传学分析,主要取得以下结果: 1)通过Southern杂交分析发现MS1与MS2均带有两个T-DNA插入。通过分别回交,选取单个T-DNA插入的株系进行T-DNA共分离分析。发现MS1与MS2均不是因为T-DNA插入导致的突变。而是体细胞变异引起的单基因隐性突变。 2)构建MS1定位群体,利用分子标记遗传图谱法,将突变位点定位在第1号染色体分子标记141886和141656之间大约230kb的范围。经过测序分析发现MS1的突变位点位于已发表基因MSP1的编码区。其编码区的第3109位碱基由C突变成T,导致其预测编码蛋白提前终止。 3)构建MS2定位群体,利用分子标记遗传图谱法,将突变位点定位在第11号染色体分子标记B29658-2和B30654(物理距离相隔约1 Mb)的范围内。 对水稻亚非杂种不育基因S1的候选基因的功能分析,主要取得以下结果: 4)构建了S1候选基因ORF10的RNAi干涉载体。 5)将构建的干涉载体以及互转载体进行遗传转化,并获得相应的转化植株。 6)检测第一批转化苗发现外源基因均没有表达,猜测是因为构建的载体启动子克隆得太短了(750bp),重新构建载体,将近等基因系的非洲稻型的ORF10-g的启动子加长到1.5kb,得到了两个转化事件,其中一个转化事件外源基因得到有效表达。并在T1代中出现了花粉育性下降,而且表型分离比例为接近1:1。 7)对转化苗后代进行分析,初步确认ORF10为目的基因S1。