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背景和目的哮喘在儿童时期最常见,多数成人哮喘也在婴幼儿时期起病,提示生命早期历程在哮喘发病中有重要影响,越来越多研究表明生命早期细菌感染与以后哮喘发生相关：孕期母亲患慢性绒毛膜羊膜炎,孩子7岁前反复喘息及患哮喘风险增高；分娩时母亲子宫有链球菌、厌氧菌感染,后代17岁时哮喘风险显著增加；1岁内反复呼吸道细菌感染是哮喘危险因素。肺炎链球菌是儿童社区获得性呼吸道感染最常见细菌病原体,也是哮喘患者呼吸道常见分离菌。Bisgaard等发现健康新生儿呼吸道有肺炎链球菌携带或感染,以后发生持续喘息、急性重症喘息和因哮喘住院的风险增加,而1岁时呼吸道有肺炎链球菌定植或感染者,以后发生持续喘息、急性重症喘息和因哮喘住院的风险不会增加,提示不同年龄时期肺炎链球菌感染对以后哮喘形成影响不同。本研究旨在探讨新生期肺炎链球菌感染对实验性哮喘发生的影响及其发生机制,为哮喘防治提供新的干预思路。第一部分：新生期小鼠非致死性肺炎链球菌感染模型建立方法的探讨肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.p)主要定植于上呼吸道,可在鼻咽部黏膜存活数周,是儿童社区获得性呼吸道感染最常见细菌病原体。感染模型建立是实验研究的基础,目前建立成年小鼠肺炎链球菌感染模型方法已经成熟,但是如何建立新生期小鼠非致死性肺炎链球菌感染模型的方法尚未见报道。因此本研究探讨建立新生期BALB/c小鼠非致死性肺炎链球菌感染模型的方法,为后期研究奠定模型基础。目的：探讨建立新生期非致死性肺炎链球菌感染BALB/c小鼠的方法。方法：清洁级的新生期BALB/C小鼠80只,随机分为肺炎链球菌感染1次组、感染2次组和对照组1、2,每组20只。感染1次组于新生期第7天分别经鼻腔滴注D39肺炎链球菌107CFU、108CFU、109CFU、1010CFU液各10μ l；感染2次组于新生期第6、7天连续2天经鼻腔滴注D39肺炎链球菌107CFU、108CFU、109CFU、1010CFU液各10μ l；对照组1、2于第7天和第6、7天分别经鼻腔滴注PBS液10μl。最后一次鼻腔滴注后24小时随机抽取10只小鼠处死,取肺组织匀浆行细菌培养及鉴定,HE染色观察肺组织病理改变。剩余10只连续观察5天。结果：感染2次109CFU肺炎链球菌组小鼠出现安静少动,皮肤苍白,体重增长下降；其感染率与存活率均>85%；小鼠肺组织细菌培养鉴定为肺炎链球菌；病理显示肺部出现炎症改变,肺泡间隔有增厚,血管和支气管周围有一定程度炎症细胞浸润。结论：新生期第6、7天感染109CFU肺炎链球菌是成功建立新生期BALB/c小鼠非致死性肺炎链球菌感染模型的较好方法。第二部分新生期肺炎链球菌感染对小鼠成年后哮喘影响的实验性研究支气管哮喘,是儿童最常见的慢性呼吸道疾病,其本质是气道的慢性炎症,其病理变化与免疫系统的情况密切相关。但不能将哮喘的发病本质简单归于Thl/Th2细胞的功能失衡,近年来研究发现TH17/IL-17在哮喘疾病的发病机制中扮演了重要的角色。Th17细胞是近年来发现的CD4+T细胞亚群,不同于Th1、Th2和Treg细胞,以分泌IL-17这一促炎症细胞因子为主,在自身免疫疾病及感染疾病中发挥重要作用。肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,SP)是儿童社区获得性呼吸道感染最常见细菌病原体,也是哮喘患者呼吸道常见分离菌。有临床研究对于喘息和哮喘疾病的发生,肺炎链球菌的感染年龄是一个关键因素。本研究旨在进一步研究生命早期感染肺炎链球菌对哮喘发生的影响及其机制。目的：研究生命早期感染肺炎链球菌是否通过TH17/IL-17影响哮喘发生及其机制。方法：SPF级新生期BALB/c小鼠80只,随机分为4组,分别为：肺炎链球菌感染哮喘组(S.p+OVA)、感染组(S.p)、哮喘组(OVA)和空白对照组(Control)。感染哮喘组和感染菌组均在小鼠出生6、7天通过鼻腔接种肺炎链球菌,感染哮喘组和哮喘组用OVA(卵清蛋白)致敏与激发。使用小鼠肺功能仪检测小鼠的气道高反应性(AHR)；用HE染色后用显微镜观察小鼠肺组织的病理变化；光学显微镜计数小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类；ELISA检测BALF中INF-γ、IL-4、IL-5、IL-17、TGF-β及IL-10；流式细胞术(FCM)检测CD4+T细胞各亚群表达情况。结果：S.p+OVA组小鼠出现明显喘息症状；肺功能检测发现该组气道高反应显著高于单纯的OVA组小鼠。S.p+OVA组和OVA组小鼠肺组织出现明显炎症,肺泡间隔有不同程度增厚,血管周围和支气管周围存在不同程度的炎症细胞浸润,S.p+OVA组较OVA组更严重。S.p+OVA组BALF中细胞总数明显增加,分类比例嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞均有增加,以中性粒细胞增加最明显。S.p+OVA组中TH1细胞与IFN-y下降,TH17细胞与IL-17明显上升；TH2与IL-4无明显改变,但IL-5水平有所升高；Treg及其细胞因子无明显改变。结论：BALB/c小鼠新生期感染肺炎链球菌后通过影响TH17/IL-17可加重成年后哮喘。