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NG-18（N-（2-ethoxyethyl）gambogamide）是由中科院上海药物研究所段文虎课题研究组对藤黄中的有效成分藤黄酸（gambogic acid，GA）结构修饰而得到的新化合物。本研究首先评价该化合物体外抗肿瘤活性，进而对其诱导HL-60细胞凋亡作用机制进行初步探讨。体外抑制细胞增殖实验中，悬浮细胞我们采用四氮唑盐还原法（3-（4，5-dimethylthiazol-2-y1）-2，5-diphenyl tetrazolium bromide，MTT），贴壁细胞采用磺酰罗丹明B蛋白染色法（Sulforhodamine B，SRB）来观察NG-18对19株肿瘤细胞（包括2株白血病，2株肺癌，3株胃癌，3株结肠癌，3株乳腺癌，2株卵巢癌，1株宫颈癌和3株肝癌）体外增殖抑制作用。结果显示NG-18对这些肿瘤细胞均有显著地增殖抑制作用，具有广泛的细胞毒作用。NG-18和母核GA的平均IC50值分别为0.86μM和1.24μM，因此NG-18的体外抗肿瘤能力要高于其母核GA。接着，我们在人白血病细胞HL-60上运用PI染色-流式细胞分析、Annexin V-FITC结合实验、DNA片段化电泳分析等方法来观察NG-18对HL-60细胞凋亡和细胞周期的影响。结果表明NG-18有很强的诱导细胞发生凋亡的作用，并且呈时间和剂量依赖性。通过流式细胞分析，我们可以发现0.5μM NG-18作用6h和1μM NG-18作用3h，就能发生明显的细胞凋亡。DNA片段化电泳分析结果显示，0.5μM NG-18作用6h后，出现了明显的DNA梯状条纹，表明细胞发生了凋亡。但是NG-18在诱导HL-60细胞凋亡的过程中并没有影响其细胞周期的分布。我们对NG-18诱导HL-60细胞凋亡的机制进行了初步的探讨。首先我们用碱性单细胞凝胶电泳来检测细胞凋亡早期，细胞核DNA是否发生了断裂。结果表明NG-18并非是通过诱导细胞核DNA发生断裂而引发细胞凋亡。在凋亡程序的启动及执行过程中，有一大类蛋白酶家族Caspases起着十分重要的作用。Caspases（Cystein-containing，aspartat-specific proteases）的本质是一类半胱氨酸蛋白酶，在正常的状态下，它们以无活性的酶原（proenaymes）形式存在。用Western Blot的方法我们发现，在NG-18诱导HL-60细胞凋亡的过程中，胞外和胞内两条凋亡信号通路上的启动Caspases，Caspase-8和Caspase-9几乎能同时被激活。这一结果表明胞外和胞内两条凋亡途径都参与了NG-18诱导的HL-60细胞凋亡。接着，我们预先用Caspases泛抑制剂（Z-VAD-FMK）处理细胞，再加入NG-18，结果显示Z-VAD-FMK能够完全抑制NG-18诱导的细胞凋亡。我们用其它的Caspases抑制剂如Caspase-2抑制剂（Z-VDVAD-FMK）、Caspase-9抑制剂（Z-LEHD-FMK）和Caspase-8抑制剂（Z-IETD-FMK）相同的方法处理细胞，结果表明只有Caspase-8抑制剂（Z-IETD-FMK）才能大部分抑制NG-18诱导的细胞凋亡，抑制效果约为66.7％。以上结果提示，NG-18诱导细胞凋亡是依赖于Caspases途径，并且在此凋亡过程中，Caspase-8处于中心地位，起着关键性的作用。综合以上结果，我们得出以下结论：虽然胞外和胞内两条凋亡途径都参与了NG-18诱导的HL-60细胞凋亡，但是胞外途径是主要的凋亡途径。在NG-18诱导HL-60细胞凋亡的过程中，Bcl-2家族蛋白中的Bcl-2、Bax和Bid蛋白也参与其中。综上所述，本研究阐明NG-18具有较强的体外抗肿瘤活性，并发现该化合物能够强烈的诱导肿瘤细胞凋亡的发生，而对肿瘤细胞的细胞周期无明显影响。NG-18诱导HL-60细胞凋亡是依赖于Caspases途径，并且Caspase-8在该凋亡过程中起着关键的作用，一些Bcl-2家族蛋白也参与了该凋亡过程。