【摘 要】
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多糖是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的大分子天然多聚合物。真菌多糖是指真菌子实体和菌丝体产生的一类代谢产物,具有广泛的药理学活性。樟芝（Taiwanofungus camphoratus）是一种台湾特有的珍贵药用真菌,具有抗肿瘤、保肝和抗炎等作用。多糖作为樟芝中重要的活性成分,对巨噬细胞功能的影响尚不清楚。多糖的生物活性与其分子量大小、化学组成、糖残基连接方式等结构特征关系密切。而多糖的来源、
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多糖是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的大分子天然多聚合物。真菌多糖是指真菌子实体和菌丝体产生的一类代谢产物,具有广泛的药理学活性。樟芝（Taiwanofungus camphoratus）是一种台湾特有的珍贵药用真菌,具有抗肿瘤、保肝和抗炎等作用。多糖作为樟芝中重要的活性成分,对巨噬细胞功能的影响尚不清楚。多糖的生物活性与其分子量大小、化学组成、糖残基连接方式等结构特征关系密切。而多糖的来源、提取和纯化方式等的不同与获取的多糖种类直接相关。本课题拟优化获得樟芝多糖的最佳提取条件,并分离纯化获得一种分子量均一的樟芝多糖,考察其对巨噬细胞功能的影响。本课题用液态深层发酵技术对樟芝菌株进行扩大培养,获得菌丝体;将菌丝体冻干磨碎后,进行除脂,结合单因素法对影响多糖提取率的热水浸提温度、时间和液料比进行优化,最终结果即温度:90℃,时间:4 h,液料比:35:1时多糖提取率最高。在单因素优化结果的基础上,利用响应面分析法实验设计,考察提取温度、时间和液料比对多糖提取的交互影响,并确定三者的最佳参数,获得最佳提取条件即温度:93.6℃,时间:4.5 h,液料比:40:1。对优化后的条件进行验证,结果显示,多糖提取率较优化前升高19%。提取出的樟芝多糖,经除蛋白和醇沉处理后,获得樟芝粗多糖。采用纤维素DEAE-52、葡聚糖凝胶G-25、葡聚糖凝胶G-50等方法对樟芝粗多糖进行分离纯化,筛选获得分子量均一的樟芝纯化多糖,命名为ACPSA,并对ACPSA的分子量和单糖组分进行测定,最终测得樟芝多糖ACPSA的Mp、Mw、Mn分别为13.924 KDa、16.088 KDa、11.696 KDa。ACPSA由三种糖组成,分别是半乳糖、葡萄糖和甘露糖,三者的摩尔比为0.122:0.835:0.042。以ACPSA为研究对象,将其作用于人单核细胞（THP-1细胞）和小鼠原代骨髓巨噬细胞（BMDM细胞）,探究其对单核细胞分化和巨噬细胞功能的影响。结果证明樟芝多糖ACPSA可以促进THP-1单核细胞向巨噬细胞分化,并使THP源巨噬细胞和小鼠骨髓巨噬细胞发生M1型极化,增强其分泌IL-6、IL-1β、TNF-α、CD86、i NOS等促炎因子,同时能够抑制巨噬细胞的凋亡。本文优化获得樟芝粗多糖最佳提取条件;通过分离纯化获得了一种尚未见报道,分子量均一的樟芝多糖ACPSA;该多糖可调节巨噬细胞功能,增强免疫效应。本研究可为相关产品开发和药理机制研究的开展提供理论基础。
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