【摘 要】
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苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)是一种产芽孢的革兰氏阳性细菌,它是目前世界上应用最广的杀虫微生物,被广泛用于防治农业、林业中的多种害虫。有研究表明,苏云金
【出 处】
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中国科学院研究生院 中国科学院大学
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苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)是一种产芽孢的革兰氏阳性细菌,它是目前世界上应用最广的杀虫微生物,被广泛用于防治农业、林业中的多种害虫。有研究表明,苏云金芽孢杆菌对血吸虫的宿主钉螺具有杀伤活性。本研究建立了在实验室Bt杀钉螺的毒力生物测定方法,并在前期工作基础上检测了67株Bt菌株发酵液对钉螺的活性。经过筛选获得了几株有效菌株,对这些菌株的发酵液不同组分分析发现,其杀钉螺的活性成分存在于发酵上清液中。选取其中杀螺活性最高且效果稳定的一株菌株AOH-01进行进一步研究。
菌株AOH-01的鞭毛抗原血清型属于H27,实验表明,用该菌株稀释10倍的上清液感染钉螺24小时的致死率在50%以上,感染钉螺72小时的致死率在90%以上。该菌株上清液经酸碱、1%SDS、灭菌处理后活性下降,但在100℃处理1小时仍具有较高活性。对不同培养时间的发酵液进行生物测定后发现,该活性成分在培养8小时时产生,40小时后产量达到最大。由于上清液经过高温处理仍然具有较高活性。对AOH-01菌株发酵上清液中的β-外毒素进行了检测,经过HPLC检测分析和β-外毒素杀钉螺的毒力生物测定表明,AOH-01及其他几株对钉螺有活性的Bt菌株均不产生β-外毒素,且β-外毒素基本上没有杀螺活性。发酵上清液经过3.5kD透析袋透析处理后,透析液和透析保留液均对钉螺具有毒性,推测活性成分的相对分子量应在3.5kD以下。将3.5kD透析袋处理后的透析液经全波段紫外扫描发现在210nm处有吸收峰。根据有机溶剂极性表选择7种有机溶剂对上清液进行萃取后旋转蒸发,分别将得到的可溶性与不溶性组分进行毒力生物测定,发现正丁醇等四种有机溶剂萃取后得到的可溶性成分具有活性,初步判定该活性物质可能为温度耐受性较高的可溶性小分子多肽。
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