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目的:探讨环孢素A(cyclosporineA,CsA)对植入前小鼠胚胎细胞的增殖、分化及其黏附与侵袭功能的影响,为临床中改善胚胎种植提供新的思路和方法。
方法:取小鼠1.5dpc/3.5dpc胚胎,在含有不同浓度CsA的G-1/G-2培养液中(第一组:10μM;第二组:1μM;第三组:0.1μM;第四组:0μM,对照)序贯培养。5.5dpc以后的培养使用lammin包被的35mm平皿。每天下午2时观察胚胎。3.5dpc时观察囊胚形成情况;4.5dpc时运用免疫染色方法计数囊胚的细胞总数、内细胞团(innercellmass,ICM)及滋养层的细胞数目;5.5dpc时观察囊胚孵出;7.5dpc时胚胎的粘附并拍照测量其在皿里的伸展面积。计数用SPSS16.0软件包处理和差异性检验,P<0.05时,差异有统计学意义。
结果从小鼠胚胎1.5dpc起,加入不同浓度的CsA,3.5dpc时第一、第二、第三和第四组的囊胚形成率分别为:87.9%、84.1%、84.5%和82.7%(和第四组比较P值分别为:0.180、0.778、0.673)。4.5dpc时,第一、第二、第三和第四组囊胚细胞总数分别为:57.1622±17.25546、54.359±12.17523、52.8611±9.68106、49.234±11.46870。与对照组相比,P分别为:0.019、0.046、0.148。滋养外胚层细胞数:44.9730±14.57450、42.1026±11.85170、40.5278±10.93146、38.6383±8.92664。与对照组比较,P分别为:0.025、0.163、0.401。ICM细胞数:12.1892±4.08138、12.2564±3.54459、12.3333±3.94244、10.5957±3.68699。与对照组比较,P分别为:0.064、0.031、0.042。5.5dpc时第一、第二、第三和第四组囊胚孵出率依次为:80.5%、72.3%、74.2%、70.3%。与对照组比较,P值分别为:0.046、0.710、0.445。从小鼠胚胎3.5dpc起加入不同浓度的CsA,7.5dpc第一、第二、第三和第四组胚胎黏附率分别为:81.0%、90.5%、90.8%、82.9%。与对照组比较,P分别为:0.738、0.09、0.06。黏附胚胎在皿中伸展面积(单位:μM2)第一、第二、第三和第四组分别为:20509±10403.46324、23076±8950.46379、17830±8112.33932、16537±8663.28995。P分别为:0.118、0.004、0.54。
结论:1.不同浓度(10μM、1μM、0.1μM、0μM)的CsA在小鼠胚胎早期发育过程,对小鼠胚胎囊胚形成的影响差异没有统计学意义。
2.CsA可以促进植入前胚胎的细胞增值,其中在10μM浓度下可以增加滋养层的细胞数,而在1μM及0.1μM浓度下可以增加囊胚的内细胞数量。
3.CsA在10μM的浓度下能够促进小鼠胚胎的孵出。
4.CsA在1μM浓度下可以显著增加胚胎在Laminin包被的平皿中的伸展面积,揭示CsA能够增强胚胎的侵袭能力。