流感病毒感染的中性粒细胞作为载体介导病毒对宿主机体的多器官感染

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自2009年H1N1甲型流感病毒的全球大爆发后,21世纪的人类已经经历了数次流感病毒的季节性和区域性小流行,由于其爆发迅速而且传播广泛的特点,极易导致成千上万人的感染和死亡。H1N1和H5N1甲型流感病毒是两株在世界范围内对人类健康具有极大威胁的新型流感病毒,H1N1流感病毒拥有很高的人传人传播率,而高致病性禽流感病毒H5N1则拥有超过60%的高致死率。早先的研究发现,H1N1流感病毒拥有两段H5N1流感病毒基因序列片段,是拥有HIN1和H5N1两种类型特征的流感病毒。值得注意的是这两种病毒株拥有极高的相似性,尤其是致病性和致死性更高的2009 H1N1与H5N1相比,则拥有更多症状上的相似性。  我们以前的研究结果表明H5N1禽流感病毒感染的病人存在多器官感染的现象,包括肺部以外的脾脏、肝脏、淋巴结、胃肠道、肾脏和脑等器官。从H5N1病人的外周血中可检测到病毒血症及被感染的免疫细胞,因此病毒极有可能是通过病毒血症或者被感染的免疫细胞而导致肺外广泛播散和多器官感染的结果。此外,2009 H1N1感染的病人尸检报告指出亦存在中性粒细胞被病毒感染的现象,至此我们猜测中性粒细胞很可能作为流感病毒的载体之一介导人体多器官感染。  为了证实这一假设的正确性我们进行了以下三个方面的工作:1.分离和纯化人的外周血中性粒细胞;2.验证中性粒细胞是否可以被2009 H1N1流感病毒感染并且激活病毒在细胞的复制和释放;3.细胞共培养实验验证病毒感染的中性粒细胞是否可介导宿主机体多器官感染。主要的实验结果如下:  1.分离和纯化人的外周血中性粒细胞。  从健康志愿者的血液样本中分离纯化新鲜的中性粒细胞。通过免疫荧光法和流式细胞术验证分离细胞的特异性及其纯度。实验结果显示分离的中性粒细胞纯度高达99.2%。2.2009 H1N1流感病毒株感染人外周血中性粒细胞并且激活病毒颗粒在细胞内的复制和胞外释放。  将分离出的中性粒细胞与2009 H1N1流感病毒共同孵育,利用实时荧光定量PCR、免疫蛋白质印记和免疫荧光法等实验技术,我们证实了2009 H1N1可以感染人的中性粒细胞,并可引起中性粒细胞形态发生显著地变化,包括细胞膜的完整性损坏、核固缩和核碎裂等。通过 TCID50实验,我们在病毒感染后的中性粒细胞培养上清中检测到新释放出的有活性的成熟病毒颗粒。以上这些结果显示2009 H1N1病毒可以感染中性粒细胞并在其中复制进而释放出新增殖的、成熟的病毒颗粒。  3.细胞共培养实验验证病毒感染的中性粒细胞可作为载体介导病毒对宿主的多器官感染。  通过与人的正常细胞系共培养,我们发现2009 H1N1流感病毒感染的中性粒细胞可释放出新的成熟病毒颗粒感染其它细胞。利用免疫细胞化学法和流式细胞术检测手段,我们发现新合成的病毒颗粒对细胞的感染率更高。  综上所述,本研究的实验结果显示2009 H1N1流感病毒不仅可以感染人的中性粒细胞,而且还可以在细胞内完成复制并释放出成熟的病毒颗粒。因此,2009 H1N1流感病毒感染的中性粒细胞可以视为流感病毒的载体而介导宿主机体的多器官感染。
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