本课题以仿刺参加工的副产物-仿刺参生殖腺为原料，经显微鉴定后分出仿刺参卵和仿刺参精，对精和卵的营养成分进行了测定。然后以仿刺参卵为研究对象，优化了其酶解工艺条件，结合超滤法制备出仿刺参卵多糖和梯级肽，对梯级肽的化学抗氧化活性及细胞活性进行了研究，最后以得率和活性为导向分离出纯化多肽。主要研究内容如下：1.仿刺参生殖腺营养成分测定仿刺参卵营养较均衡，其中粗蛋白含量达到50.72g/100g，粗多糖含量高达27.25g/100g，粗脂肪中多以磷脂形式存在。使用高效液相色谱分析仿刺参卵氨基酸组成，得出仿刺参卵氨基酸总量及必需氨基酸的总量分别为347.19mg/g和176.27mg/g。含量较高的氨基酸有Glu、Asp、Leu和Lys。仿刺参精的粗蛋白含量高达72.76g/100g，其中氨基酸总量与必需氨基酸总量分别为536.95mg/g和250.74mg/g，含量较高的氨基酸有Glu、Lys、Ala、Asp和Arg。2.仿刺参卵酶解工艺条件优化通过酶种类的筛选，水解方式的选择，确定了最佳酶解工艺条件，即先以混合酶(木瓜蛋白酶:复合蛋白酶=1:1，酶质量比)在加酶量2%、酶解温度75℃条件下酶解4h，煮沸灭酶活后添加风味蛋白酶在加酶量1.5%、酶解温度45℃条件下继续酶解1h，在此工艺条件下仿刺参卵的水解度达到了77.11%。本实验采用了三种外源酶，并结合海参卵中的自溶酶，从而形成了多酶体系，结果表明本实验对仿刺参卵的酶解工艺优化成功，不仅节约了成本，提高了经济效益，并且水解过程产生了丰富的多肽与氨基酸，得到的水解液鲜香浓郁，颜色鲜亮，状态均匀澄清，可用于开发风味独特的功能食品。3.仿刺参卵多糖的制备本实验通过采用梯度稀释法，优化了超滤法分离仿刺参卵多糖、多肽及制备仿刺参卵梯级肽的工艺方法。试验中使用三氯醋酸法沉淀可得到除去蛋白的多糖，通过紫外光谱扫描沉淀的多糖，发现在190nm到200nm处有强烈单一吸收峰，在其它波长处基本无吸收。然后采用葡聚糖凝胶G-100对精制后的多糖进行纯化，分离得到一个无拖尾的多糖峰，采用葡聚糖凝胶G-200在线检测，结果显示只有一个谱峰。使用标准葡萄糖进行洗脱对比，得出仿刺参卵纯化后的多糖分子质量大于200KDa。通过本实验获得了分子质量相对集中的仿刺参卵纯化多糖。4.梯级肽制备及其活性研究通过超滤法分离制备得到三种截留分子质量范围的梯级肽，即F1：分子质量1～10KDa的多肽、F2：分子质量650Da～1KDa的多肽和F3：分子质量﹤650Da的多肽，三种梯级肽的得率分别为F1：0.737%、F2：0.295%及F3：0.515%(鲜重)。对分离得到的仿刺参卵梯级肽进行了化学抗氧化研究和细胞活性研究，化学抗氧化结果显示，F1、F2及F3均体现出较强的清除DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基能力，并且在一定浓度范围内呈现量效关系。其中F1与F2和F3相比表现出明显较高的DPPH和O2-的清除能力，而在清除OH的能力方面3个组分基本相似。细胞活性结果显示，仿刺参卵多肽三个组分对巨噬细胞都起到一定的增殖作用，且终浓度为100、200、400μg/mL的样品对过氧化氢损伤的巨噬细胞保护作用非常明显，三个样品的吸光度值与模型组相比为极显著差异(P<0.01)，仿刺参卵梯级肽在细胞活性上F1组分略好于另外两个组分。5.多肽纯化及理化分析F1组分经过Tricine-SDS-PAGE电泳分离，结果显示F1有多条条带，分子质量集中分布在6.5～35KDa之间。然后使用高速逆流色谱法分离F1得到4个独立的谱峰，通过测定其四个组分清除自由基能力，得出F1四个组分的自由基清除能力均高于三种梯级肽，其中F1-1组分清除OH的能力最强，当浓度为5mg/mL时，清除OH的能力达到了82.95U/mL。将F1-1先后经过Sephadex G-100和Sephadex G-50进行分离纯化后，得到三个组分，其中F1-1-3是一个窄高峰，含量是三个组分中最高的。实验发现F1-1-1和F1-1-3表现出较强的清除OH的能力，且都高于F1-1。当F1-1-3浓度为5mg/mL时，清除OH的能力达到了89.82U/mL。F1-1-3经过Tricine-SDS-PAGE电泳分离检测，显示出一条清晰无拖尾条带，说明F1-1-3已经达到电荷均一。与标准分子质量蛋白对比得出，其分子质量在30KDa左右。紫外全波长扫描显示F1-1-3在紫外有两处吸收峰，分别是肽键和苯丙氨酸的特征吸收位置，使用反相高效液相色谱法在214nm分析检测F1-1-3，结果显示其是一种较纯的物质。