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目的:本实验通过制备培养CIK细胞观察其对胆管癌QBC939细胞的杀伤作用,并进一步探讨吉西他滨联合CIK细胞对胆管癌细胞的杀伤效应。方法:采集健康人的外周血,离心得到单核细胞(PBMC),然后再用CD3单抗和IFN-g、IL-2等多种细胞因子在体外刺激、诱导其成为CIK细胞,使用光学显微镜观察记录CIK细胞不同时期的形态和生物学特点,约在培养的第14天收集生长状态好的CIK细胞为效应细胞。利用流式细胞法分析该效应细胞的特异性表型,以证明其有效性。后将不同效靶比的CIK细胞和不同浓度梯度的吉西他滨单独或联合作用于体外培养的人胆管癌QBC939细胞,于培养24 h及48 h后用CCK8法测定CIK细胞、吉西他滨及两者联合对胆管癌细胞的生长抑制率,用蛋白印迹法测定细胞凋亡相关蛋白Bax的相对表达情况。结果:经过激活、诱导的准CIK细胞在体外正常培养第5天时CIK细胞开始快速增殖,呈簇状生长,镜下可见散在细胞集落。之后CIK细胞快速倍增,第10天时细胞数量约为培养前的10倍以上,镜下可见多个密度较大细胞团。培养14天时,FCM法测定细胞表面的特异双阳性T细胞,发现CD3+CD4+、CD3+HLA-DR+、CD3+CD56+、CD4+CD25+、CD3+CD8+所占比例分别为10.89%、71.82%、9.03%、4.01%和60.27%,符合CIK细胞的基本表型特征;CIK及吉西他滨对人胆管癌QBC939细胞的抑制率随着效靶比和药物浓度的提高及作用时间的延长而提高,差异显著。而两者联合对人胆管癌QBC939细胞的杀伤作用明显高于单一因素,且随着时间延长,其对癌细胞的毒性作用依然存在。当吉西他滨药物浓度固定时,提高CIK细胞的效靶比,细胞凋亡更为明显。化疗药物浓度和CIK细胞效靶比都不变时,48h组的细胞毒作用大于24h组。蛋白水平检测提示CIK细胞和吉西他滨均可使人胆管癌QBC939细胞的凋亡相关蛋白Bax表达上调,两者联合更为显著,各组之间Bax蛋白的表达差异具有统计学意义,侧面反映了靶细胞的生长抑制情况。结论:CIK细胞可通过诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡发挥较强的杀伤作用。联合CIK治疗可明显增强吉西他滨对人胆管癌QBC939细胞的杀伤效应。