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目的:建立成年大鼠心肌细胞分离和培养方法,以成年鼠心肌细胞为观察对象,探讨缺血后处理(Ischemic postconditioning,IPTC)与ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪药物后处理对成年鼠心肌细胞钙网蛋白(Calreticulin,CRT)表达的影响。分析后处理时CRT的表达与细胞内钙及细胞凋亡酶Caspase-3的关系。方法:选择16-20周的成年SD大鼠,应用Langendorff离体心脏灌注装置,分离培养心肌细胞。将大鼠心肌细胞随机分为正常组(NOR),对照组(CON),缺血后处理组(IPTC),二氮嗪(DZ)后处理组,5-羟葵酸拮抗IPTC组(5-HD+IPTC),5-羟葵酸拮抗DZ组(5-HD+DZ)。分离后的心肌细胞培养18小时,除NOR组持续培养外,其余各组均缺氧45min,复氧60min。IPTC组缺氧45min后即刻复氧-缺氧循环3次各3min,继续复氧60min;DZ组缺氧45min后DZ后处理10min,再复氧60min;5-HD拮抗IPTC组缺氧45min后5-HD处理5min,再行复氧-缺氧后处理,继续复氧60min;5-HD拮抗DZ组缺氧45min后5-HD处理5min,再行DZ后处理10min,继续复氧60min不同条件处理后的心肌细胞,采用Western blotting技术、激光共聚焦显微镜扫描、酶标仪检测等,观察各组心肌细胞处理后CRT表达与心肌细胞内游离钙荧光强度的变化情况,以及心肌细胞凋亡酶Caspase-3活性的变化情况。结果:1.分离的成年大鼠心肌细胞活性比例约80%-90%,显微镜下观察细胞呈杆状、横纹清晰,有间断不规则的自主收缩。2.CRT表达情况:IFFC组和DZ组表达明显高于CON组(P＜0.01);而5-HD+IPTC组和5-HD+DZ组CRT表达与CON组相似(P＞0.05);5-HD+IPTC组和5-HD+DZ组相比,组间无统计学意义。3.心肌细胞内游离钙荧光强度的变化情况:CON组与NOR组比较,心肌细胞内游离钙荧光强度明显高于NOR组(P＜0.01);同时,CON组也明显高于IPTC组和DZ组,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);IPTC组和DZ组与5-HD+IPTC组和5-HD+DZ组比较,细胞内游离钙荧光强度显著低于2个拮抗组(P＜0.01);而5-HD+IPTC组和5-HD+DZ组与CON组比较,组间无统计学意义(P＞0.05)。4.Caspase-3活性的变化情况:与NOR组比较,CON组Caspase-3活性升高(P＜0.01);与CON组比较,IPTC组和DZ组Caspase-3活性明显降低(P＜0.05);与IPTC组比较,2个拮抗组Caspase-3的活性显著升高(P＜0.01),而2拮抗组Caspase-3活性组间无统计学意义。结论:1.应用Langendorff离体心脏灌注可以对成年大鼠心肌细胞进行较好的分离培养;2.心肌细胞CRT的表达参与了缺血/再灌注损伤的保护。CRT表达升高,减轻了细胞钙超载,从而抑制钙超载诱导的细胞凋亡的发生;3.IPTC及DZ后处理能够上调CRT的表达,减轻心肌细胞内钙超载,降低细胞内Caspase-3的活性,减缓心肌细胞凋亡的发生,保护缺氧/复氧损伤的心肌细胞;4.线粒体ATP敏感性钾通道的开放可能促使CRT的表达上调。