【摘 要】
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拉关木和木榄主要分布在我国的海南省与福建省。本文针对拉关木和木榄红树植物缩合单宁进行结构分析与生物活性研究。拉关木叶总酚含量353.74±0.36 mgGAE/g DW,缩合单宁（CTs）含量为105.72±2.50 mg/g DW,木榄叶总酚含量 251.48±0.27 mgGAE/g DW,CTs 含量为 133.75±0.04 mg/g DW。经 13C NMR质谱鉴定CTs的结构,结果表明
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拉关木和木榄主要分布在我国的海南省与福建省。本文针对拉关木和木榄红树植物缩合单宁进行结构分析与生物活性研究。拉关木叶总酚含量353.74±0.36 mgGAE/g DW,缩合单宁（CTs）含量为105.72±2.50 mg/g DW,木榄叶总酚含量 251.48±0.27 mgGAE/g DW,CTs 含量为 133.75±0.04 mg/g DW。经 13C NMR质谱鉴定CTs的结构,结果表明拉关木叶CTs和木榄叶CTs主要由含有原花青定（PC）组成,同时含有少量的原翠雀定（PD）、原天竺葵定（PP）,不含酯化的PC,黄烷-3-醇的C2、C3位存在顺式和反式结构,以2,3-顺式立体化学结构为主。不同的是,拉关木叶CTs由黄烷-3-醇通过C4-C8键连接,而木榄叶CTs由黄烷-3-醇通过C4-C6键连接。反相高效液相色谱（RP-HPLC）结果表明拉关木叶CTs和木榄叶CTs的末端单元主导峰为儿茶素、儿茶素/表儿茶素（C/EC）,对应结构为原花青定（PC）,延伸单元的主导峰为儿茶素/表儿茶素苄硫醚（C/EC）,其次是棓儿茶素/表棓儿茶素苄硫醚（GC/EGC）和阿福豆素/表阿福豆素苄硫醚（AF/EAF）。不同之处在于拉关木叶CTs的平均聚合度mDP为17.3,木榄叶CTs 的 mDP 为 4.85。抗氧化分析方面,拉关木叶CTs、木榄叶CTs DPPH自由基清除效果大小的IC50值分别为71.92±0.134μg/mL、88.81±0.135 μg/mL低于相同条件下阳性对照 Vc 的 96.95±0.333 μg/mL、97.65±0.153 μg/mL。ABTS 自由基清除的IC50值为 81.35±0.158 μg/mL,105.03±0.134 μg/mL。FRAP 还原能力以抗坏血酸含量表示分别为 1235.50±3.810mgAAE/g、1052.27±4.170mgAAE/g,结果表明,拉关木叶CTs、木榄叶CTs均具有强抗氧化活性,是良好的抗氧化剂且拉关木叶CTs的抗氧化能力显著高于木榄叶CTs。酶学实验表明拉关木叶CTs、木榄叶CTs抑制蘑菇酪氨酸酶（mTYR）二酚酶活力的IC50分别为7.57±0.138 μg/mL,123.90±0.140 μg/mL,抑制机理和类型为可逆混合型抑制。荧光淬灭光谱结果表明两种植物CTs能够与酪氨酸酶（TYR）相互作用,从而降低酶活力。抑菌效果方面,分别研究了植物单宁对大肠杆菌7239,鼠伤寒沙门氏菌10334,铜绿假单胞菌346,金黄色葡萄球菌12029等4种菌的抑菌效果。结果显示,拉关木叶CTs对以上4种菌均具有抗性,且呈现剂量效应。木榄叶除了对鼠伤寒沙门氏菌的抑制作用较弱外,对其余3种细菌均具有抗性。以小鼠黑色素瘤B16F10细胞为研究对象探究抑黑机理,拉关木叶CTs在200μg/mL时,黑色素含量达到31.00%,B16F10细胞内TYR酶活力降低至24.30%。木榄叶CTs在500 μg/mL时,黑色素含量达到16.64%,B16F10细胞内TYR酶活力降低至25.99%。通过qPCR和Werstem Blot检测Mitf、Tyr基因家族在转录水平和翻译水平的变化情况,我们推测两种植物中提取的CTs可能通过MC1R/α-MSH黑色素合成通路下调MITF、TYR、Tyrp-1等相关蛋白表达,导致细胞内TYR酶活性和黑色素含量的降低。用250μg/mL,1000 μg/mL的拉关木叶CTs和500μg/mL,1000μg/mL的木榄叶CTs处理鲜切莲藕,探讨CTs在果蔬保鲜中防止褐变的作用。结果表明,CTs通过抑制PPO,POD活性,防止总酚的氧化,减缓MDA的含量的增加,延缓膜脂过氧化程度,从而减缓失重率的增加和防止莲藕的褐变。本论文研究结果表明,拉关木叶CTs和木榄叶CTs均具有抗TYR活性和抗氧化活性,为后续食品保鲜、美白等深入研究奠定基础和科学依据。
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