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目的:
1.观察脑缺血-再灌注(CIR)大鼠早期脑梗死体积的变化及三化汤对其影响;
2.观察CIR大鼠缺血区脑组织病理变化及三化汤对其影响;
3.观察CIR大鼠脑组织中钠离子通道的表达及三化汤对其影响,并探讨三化汤的脑保护作用机制。
方法:
195只健康成年Sprague-Dawlay(SD)大鼠,随机分成假手术组(S组)、模型组(M组)及三化汤治疗组(T组)。线栓法制作CIR的动物模型,缺血2h后拔出线栓实现再灌注,S组除不插线栓外,其余操作与M组相同。模型制作前,S组、M组每只大鼠先用生理盐水(4ml/Kg/d)灌胃3天,T组每只大鼠先用三化汤(4ml/Kg/d)灌胃3天。定模型缺血2h为第0时,S组、M组于处死前继续以生理盐水(4ml/Kg/d)灌胃;T组于处死前继续以三化汤(4ml/Kg/d)灌胃,分别于再灌注后6h、12h、24h、48h、72h,评价各组动物神经功能缺损并取出大鼠脑组织进行以下实验:1.2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色并计算CIR大鼠脑梗死体积;2.苏木精-伊红(HE)染色观察梗死区组织病理学变化;3.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定Nav1.1mRNA表达。
结果:
1.神经功能缺损评分:S组大鼠不同时间点评分均为0分,即无神经功能缺损;M组、T组各时间点均出现不同程度神经功能缺损;
2.大鼠脑梗死体积测定:S组大鼠脑组织呈均匀红色,未见梗死灶;M组大鼠脑组织可见苍白梗死灶,且缺血体积随再灌注时间的延长而增大;T组大鼠脑组织亦可见苍白梗死灶,但再灌注时间相同的大鼠脑组织梗死体积明显较M组小,差异有统计学意义(p<0.05);
3.脑组织病理光镜观察:S组大鼠神经元、神经胶质细胞形态正常、结构完整,神经元细胞胞浆丰富、均匀,胞核呈圆形或椭圆形,核仁清晰,神经胶质细胞均匀分布于神经元细胞之间;M组大鼠缺血区神经细胞呈不同程度的缺血性改变及坏死,细胞核固缩,核周出现空泡,染色质浓缩集聚于核周围,呈新月形、环形、长条形甚至形成核碎片;与再灌注时间相同的M组大鼠比较,T组大鼠脑组织缺血性改变明显减轻,变性、坏死的神经元细胞减少,细胞肿胀程度、细胞间隙及细胞核改变、空泡化改变均减轻。
4.Nav1.1mRNA表达:M组在CIR6h后Nav1.1mRNA表达开始下降,并随再灌注时间的延长,逐渐下降到较低水平,各时间点与S组比较差异有统计学意义(P<0.05);T组Nav1.1mRNA表达随时间的推移也逐步降低,但各时间点Nav1.1mRNA表达都较M组高,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:
1.三化汤能够减小脑CIR大鼠脑梗死体积,减轻大鼠脑梗死区组织病理学变化,在缺血早期发挥其脑保护作用;
2.三化汤能显著逆转Nav1.1mRNA表达的下调,从而减少Na+内流可能是其脑保护作用的机制之一。