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背景:慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)是一种以腺体萎缩,黏膜变薄为主要特征的消化系统疾病。四君子汤(Sijunzi Decoction,SJZD)具有益气健脾之功效,临床常用于治疗慢性胃炎、消化性溃疡等疾病。本研究旨在研究四君子汤对慢性萎缩性胃炎的防治作用及机制。 目的:建立N-甲基-N-硝基-亚硝基胍(N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)诱导C57BL/6J小鼠CAG模型,以及MNNG诱导C57BL/6J ANG基因敲除小鼠CAG模型,对两种CAG模型小鼠均用四君子汤进行防治,探索四君子汤对CAG的防治作用以及四君子汤防治慢性萎缩性胃炎可能的作用机制。 方法:1)采用MNNG诱导联合60%乙醇的方法复制小鼠CAG模型,动物分为Normal,MNNG,MNNG+SJZD组,每组6只。Normal组给予自来水自由饮用并每天给予0.3ml纯净水灌胃,MNNG组给予100ug/ml MNNG水溶液自由饮用,每隔一天0.017mol/L MNNG溶液灌胃5g.kg-1.d-1,另一天60%乙醇灌胃5ml.kg-1.d-1,每进食1d,禁食1d,持续造模14周,MNNG+SJZD组造模同时给予1g/ml四君子汤10g.kg-1.d-1灌胃,持续给药14周,观察造模及给药期间小鼠体重及整体情况。给药14周处死动物,分离胃组织,测定小鼠胃重量及胃器官指数,体视显微镜及HE染色观察小鼠胃组织学情况,IHC观察小鼠胃粘膜细胞增殖、凋亡、干细胞标记物Troy表达以及ANG表达情况。 2)采用MNNG诱导联合60%乙醇的方法建立ANG基因敲除小鼠CAG模型,动物分为ANG-/-,ANG-/-+MNNG,ANG-/-+MNNG+SJZD组,每组6只。ANG-/-组给予自来水自由饮用并每天给予0.3ml纯净水灌胃,ANG-/-+MNNG组给予100ug/ml MNNG水溶液自由饮用,每隔一天0.017mol/L MNNG溶液灌胃5g.kg-1.d-1,另一天60%乙醇灌胃5ml.kg-1.d-1,每进食1d,禁食1d,持续造模14周,ANG-/-+MNNG+SJZD组给予1g/ml四君子汤10g.kg-1.d-1灌胃,持续给药14周,观察造模及给药期间小鼠体重及整体情况。给药14周处死动物,分离胃组织,测定小鼠胃重量及胃器官指数,体视显微镜及HE染色观察小鼠胃组织学情况,IHC观察小鼠胃粘膜细胞增殖、凋亡、干细胞标记物Troy表达情况。 结果:1)成功复制了MNNG诱导的小鼠CAG模型,经MNNG诱导后,MNNG组小鼠体重增长较正常组显著减慢(P<0.01),且活动减少,毛发疏松,胃重量以及胃器官指数也显著降低(P<0.01,P<0.01),胃粘膜变薄,结构紊乱,腺体萎缩,呈现出明显的萎缩性胃炎病变。给予四君子汤防治后,较之MNNG组,小鼠体重增加(P<0.01),胃重量以及胃器官指数较模型组显著增加(P<0.01,P<0.01),胃粘膜增厚,腺体数目增多,结构清晰,炎症减轻。胃粘膜细胞增殖情况,与Normal组相比,MNNG组小鼠胃粘膜细胞增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达极显著降低(P<0.001);与MNNG组相比,MNNG+SJZD组小鼠胃粘膜细胞PCNA表达极显著升高(P<0.001);但MNNG+SJZD组小鼠胃粘膜细胞PCNA表达较之Normal组无差别(P>0.05)。胃粘膜细胞凋亡情况,与Normal组相比,MNNG组小鼠胃粘膜细胞凋亡极显著升高(P<0.001);与MNNG组相比,MNNG+SJZD组小鼠胃粘膜细胞凋亡显著降低(P<0.05),但MNNG+SJZD组小鼠胃粘膜中凋亡细胞的数量较之Normal组仍显著升高(P<0.05)。胃粘膜组织干细胞标记物Troy表达情况,与Normal组相比,MNNG组Troy表达显著降低(P<0.05);与MNNG组相比,MNNG+SJZD组Troy表达很明显升高(P<0.01),MNNG+SJZD组Troy表达较之Normal组无差别(P>0.05)。胃组织ANG表达情况,与Normal组相比,MNNG组小鼠胃粘膜细胞ANG表达显著降低(P<0.05);与MNNG组相比,MNNG+SJZD组小鼠胃粘膜细胞ANG表达显著升高(P<0.05);MNNG+SJZD组小鼠胃粘膜中ANG表达较之Normal组无差别(P>0.05)。 2)成功建立了MNNG诱导ANG基因敲除小鼠CAG模型,ANG基因敲除小鼠中,MNNG诱导的慢性萎缩性胃炎发生较之非ANG基因敲除小鼠提前,十二周即出现明显萎缩性胃炎病变。经MNNG诱导后,ANG-/-+MNNG组小鼠体重无增长,胃重量以及胃器官指数显著降低(P<0.01,P<0.01),胃粘膜变薄,结构紊乱,腺体萎缩,呈现出明显的萎缩性胃炎病变。给予四君子汤防治后,小鼠体重增加(P<0.01),胃重量以及胃器官指数较ANG-/-+MNNG组显著增加(P<0.01,P<0.01),胃粘膜增厚,腺体数目增多,结构清晰,炎症减轻。胃粘膜细胞增殖情况,与ANG-/-组相比,ANG-/-+MNNG组小鼠胃粘膜细胞增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达极显著降低(P<0.001);与ANG-/-+MNNG组相比,ANG-/-+MNNG+SJZD组小鼠胃粘膜细胞PCNA表达极显著升高(P<0.001);ANG-/-+MNNG+SJZD组小鼠胃粘膜细胞PCNA表达较之ANG-/-组无差别(P>0.05)。胃粘膜细胞凋亡情况,与ANG-/-组相比,ANG-/-+MNNG组小鼠胃粘膜细胞凋亡极显著升高(P<0.001);与ANG-/-+MNNG组相比,ANG-/-+MNNG+SJZD组小鼠胃粘膜细胞凋亡显著降低(P<0.05),但ANG-/-+MNNG+SJZD组小鼠胃粘膜中凋亡细胞的数量较之ANG-/-组仍显著升高(P<0.05)。胃粘膜组织干细胞标记物Troy表达情况,与ANG-/-组相比,ANG-/-+MNNG组Troy表达显著降低(P<0.05);与ANG-/-+MNNG组相比,ANG-/-+MNNG+SJZD组Troy表达很明显升高(P<0.01),ANG-/-+MNNG+SJZD组Troy表达较之ANG-/-组无差别(P>0.05)。 结论:1)成功复制了MNNG诱导的慢性萎缩性胃炎模型,四君子汤能有效防治小鼠慢性萎缩性胃炎,其机制与促进胃粘膜上皮细胞增殖,特别与促进胃腺体基底部的干细胞的增殖,以及抑制胃腺体细胞的凋亡有关,并且其可能通过影响ANG的表达从而发挥促进胃粘膜上皮细胞增殖和抑制凋亡作用; 2)成功建立了MNNG诱导的ANG基因缺陷鼠慢性萎缩性胃炎模型,ANG基因敲除小鼠中,MNNG诱导的慢性萎缩性胃炎提前。四君子汤亦能有效防治该模型小鼠慢性萎缩性胃炎的发生发展,其机制与促进胃粘膜上皮细胞增殖及抑制胃腺体细胞的凋亡有关,并可能与促进胃粘膜腺体基底层干细胞增殖有关。