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胰岛素抵抗(IR)是2型糖尿病及多种代谢性疾病的共同病理生理基础。而氧化应激是引起IR的关键性因素。既往有研究表明，复方制剂津力达（由人参、黄精、苍术、苦参等17味中药组成）可有效降血糖，改善2型糖尿病患者的症状，并具有保护胰岛β细胞、增加胰岛素分泌、改善IR的作用。但其具体机制尚不明确，本研究拟通过观察津力达在体外细胞水平对高脂诱导的HepG2细胞IR的影响，探讨其改善IR的机制，为临床用药提供理论依据。 目的:观察中药复方制剂津力达对高脂诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗以及氧化应激的影响，探讨津力达改善胰岛素抵抗的机制。 方法:采用高脂（含0.25 mmol/L棕榈酸培养基）干预法建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型。HepG2细胞随机分为2组，正常对照组和高脂培养基组，分别干预24小时后采用葡萄糖氧化酶法测定培养基中葡萄糖浓度，计算葡萄糖摄取率，判断造模成功。造模成功后将高脂培养基组随机分为5组，即高脂对照组(PA)、二甲双胍培养基组(Met)（二甲双胍浓度为0.2 mg/mL）、津力达低剂量组（JLD-L）（津力达浓度为0.75 mg/mL）、津力达中剂量组（JLD-M）（津力达浓度为1.5 mg/mL）和津力达高剂量组(JLD-H)（津力达浓度为3.0 mg/mL），同时设立正常培养基对照组(Con)，二甲双胍为阳性药物对照。分别干预48小时后收集细胞，采用相应试剂盒测定各组HepG2细胞氧化应激相关指标，即还原型谷胱甘肽(GSH)、脂质过氧化物(LPO)的含量，过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;DHE荧光染色检测HepG2细胞活性氧簇(ROS)的含量;Real-Time PCR检测HepG2细胞胰岛素信号通路上胰岛素受体(INSR)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶β（AKT）和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的mRNA表达水平;Western Blot检测HepG2细胞PI3K总蛋白表达水平，以及IRS-1、AKT、c-jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的总蛋白及磷酸化蛋白水平。 结果: 1、HepG2细胞的胰岛素抵抗体外模型建立 HepG2细胞培养24小时后PA组培养基中葡萄糖含量较Con组高，差异有统计学意义(P＜0.05)，胰岛素敏感性下降，表明用软脂酸诱导胰岛素抵抗体外细胞模型成功建立。 2、MTT法检测干预对HepG2细胞增殖的影响 与Con组相比，PA组分别干预24h、48h能够使HepG2细胞抑制率升高，增值率下降(P＜0.05);与PA组相比，Met、JLD-L、JLD-M、JLD-H均能提高HepG2细胞增值率(P＜0.05)，但未能恢复至Con组水平。 3、HepG2细胞胰岛素敏感性的变化 (1)胰岛素信号通路相关指标基因表达水平的变化 与Con组相比，PA组HepG2细胞INSR、IRS-1、PI3K、AKT、GLUT2的mRNA表达下降(P＜0.05);与PA组相比，JLD-L、JLD-M干预上调IRS-1、AKT、GLUT2的mRNA表达(P＜0.05)，而对INSR、PI3K无明显影响(P＞0.05); Met以及JLD-H均可上调INSR、IRS-1、PI3K、AKT、GLUT2的mRNA表达（P＜0.05），但未能恢复至Con组水平。 (2)胰岛素信号通路相关指标蛋白表达水平的变化 与Con组相比，PA组p-IRS-1/IRS-1比值显著升高，p-AKT/AKT、PI3K/β-actin比值显著降低(P＜0.05);与PA组相比，Met、JLD-M、JLD-H干预组p-IRS-1/IRS-1比值显著降低，p-AKT/AKT、PI3K/β-actin比值显著增高，差异均有统计学意义(P＜0.05)，JLD-L干预虽能降低p-IRS-1/IRS-1比值，但未能提高p-AKT/AKT、PI3K/β-actin比值。 4、HepG2细胞氧化应激 行DHE荧光染色显示，与Con组相比，PA组的细胞核内的红色荧光明显增强，表示细胞内ROS含量明显增加;不同浓度的津力达及二甲双胍干预可以显著减少红色荧光强度，减少ROS生成。HepG2细胞经高脂孵育后，抗氧化酶GSH-Px、T-SOD、CAT的活性均较Con组下降(P＜0.05)，GSH含量降低(P＜0.05)，LPO含量明显增加(P＜0.05)，药物干预后，Met、JLD-L、JLD-M、JLD-H组LPO含量较PA组减少(P＜0.05)，T-SOD、GSH-Px、CAT活性以及GSH含量较PA组增高(P＜0.05)，但药物干预组组间没有明显差异(P＞0.05)。 5、JNK、p38MAPK信号通路 与Con组相比，PA组p-JNK/JNK和p-p38MAPK/p38MAPK比值显著升高(P＜0.05);与PA组相比，津力达各个浓度组及二甲双胍干预可使p-JNK/JNK和p-p38MAPK/p38MAPK比值显著降低(P＜0.05)，但二甲双胍能使上述比值恢复至正常水平，与对照组无显著差异(P＞0.05)。 结论: 1、津力达作用于胰岛素信号通路，减轻HepG2细胞的胰岛素抵抗。 2、津力达改善HepG2细胞氧化应激，减少ROS生成，降低LPO含量，恢复抗氧化酶如SOD、GSH-Px、CAT活性，增加GSH含量。 3、津力达抑制肝脏JNK、p38MAPK应激信号通路，恢复HepG2细胞胰岛素信号传导。 总之，津力达可改善高脂诱导的HepG2细胞胰岛素敏感性，可能是通过抑制JNK和p38MAPK信号通路，降低HepG2细胞氧化应激实现的。