论文部分内容阅读
第一部分缺血后处理发挥脑保护作用的最佳方案目的:建立大鼠局灶性脑缺血后处理(ischemic postconditioning, IP)模型,探讨IP对局灶性脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤发挥脑保护作用的最佳方案。方法:成年健康雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠60只,随机分为6组:假手术组(sham)组、缺血再灌注(工/R)组、IP-15s、IP-30s、IP-45s及IP-60s亚组,每组大鼠各10只。局灶性脑缺血再灌注模型采用线栓法阻塞大脑中动脉(middle cerebral artery occlusion, MCAO)2h,拔出线栓恢复再灌注24h,IP各组方法为在MCAO2h后持续再灌注前,分别给予3个循环的15s/15s、30s/30s、45s/45s、60s/60s再灌注/缺血。各组大鼠于再灌注24h行神经功能评分,并测定细胞凋亡及脑梗死体积,确定IP发挥脑保护作用的最佳方案。结果:成功建立线栓法MCAO缺血2h再灌注24h模型。I/R组大鼠可见神经功能缺失、缺血侧大脑半球梗死及凋亡细胞大量表达。与I/R组相比,IP-15s、IP-30s、IP-45s组大鼠神经功能评分均改善(P<0.05),其中IP-15s组神经功能评分低于IP-30s和IP-45s组(P<0.05); IP-15s、IP-30s、IP-45s组较工/R组脑梗死体积及凋亡细胞计数显著显著降低,特别以IP-15s组明显(P<0.05)。 IP-60s组与I/R组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:改良线栓法制备脑缺血耐受模型切实可行;IP可减轻脑缺血再灌注损伤,发挥脑保护作用;作用效果有时间窗限制,最佳方式为再灌注15s/缺血15s,反复3次。第二部分缺血后处理对脑缺血再灌注大鼠IL-1β和TNF-α表达的影响目的:探讨IP对局灶性脑缺血再灌注大鼠白细胞介素-1β (interleukin-1β, IL-1p)和肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)表达的影响,从而阐明IP的脑保护作用机制。方法:将成年健康雄性SD大鼠110只随机分为假手术(sham)组(n=10)、缺血再灌注(I/R)组(n=50)和IP组(n=50),根据再灌注时间后两组又分为6h、12h、24h、48h、72h五个亚组。采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型,IP方法为在大脑中动脉阻闭2h后实施再灌注15s/缺血15s,反复3次。对各组进行神经功能学评分,TTC染色测定脑梗死体积,免疫组化法检测脑组织IL-1β和TNF-α蛋白的表达,原位杂交法检测IL-1β和TNF-α mRNA的表达。结果:(1)组间比较:I/R组大鼠可见神经功能缺失及缺血侧大脑半球梗死;与I/R组相比,IP组大鼠神经行为学评分改善,脑梗死体积明显减少(P<0.05)。IL-1β、TNF-α蛋白及mRNA在I/R组额顶叶大量表达,IP组各时间点IL-1β、TNF-α蛋白及mRNA表达均明显低于I/R组(P<0.05)。(2)组内比较:I/R组IL-1β、TNF-α蛋白及mRNA表达6h开始升高,24h达到高峰,后逐渐下降,24h亚组IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA表达高于其它亚组(P<0.05)。IP组IL-1β和TNF-α mRNA动态变化趋势同上。结论:IP显著下调IL-1β和TNF-α表达,缩小I/R大鼠脑梗死体积,提示IP可明显抑制脑组织I/R后的炎性反应,从而发挥神经保护作用。