藏红花素对正常儿童外周血淋巴细胞DNA损伤及修复的影响

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第一部分:藏红花素对正常儿童外周血淋巴细胞DNA损伤的影响目的探讨藏红花素(crocin)是否对正常儿童外周血淋巴细胞DNA有损伤作用。方法无菌条件下用生理盐水配制crocin、阿糖胞苷(cytarabine,Ara-c)及维生素C(vitamin C, zel C)溶液,分为对照组及实验组,对照组包括空白对照A组(crocin.0)、阳性对照B组(Ara-c0.25mg/ml)、阴性对照C组(zel C0.4mg/ml);实验组为D组,按crocin浓度的不同分为D1(0.625mg/ml)、D2(1.25mg/ml)、D3(2.5mg/ml)、D4(5mg/ml)。Ficoll密度梯度离心法提取正常儿童外周血淋巴细胞,将提取的淋巴细胞分别培养于以上各组的培养液中,培养72小时后收获细胞,单细胞凝胶电泳观察淋巴细胞尾部DNA百分比(tail DNA%,TDNA)、尾矩(tail moment, TM)及尾长(tail length, XL),姐妹染色单体分化染色法测定姐妹染色单体交换数(SCE)。结果(1)淋巴细胞尾部DNA百分比对照组A、B、C组分别为(6.14±2.12)%、(12.67±3.36)%、(6.11±2.08)%,B组明显高于A、C组(p<0.05),A组与C组之间无显著性差异(t=1.012,p>0.05)。实验组D1-D4组分别为(6.15±2.1.4)%、(6.10±2.13)%、(6.13±2.12)%、(11.44±4.17)%,D4组明显高于Dl-D3组(p<0.05),Dl、D2、D3组间无显著性差异(F=1.642,p>0.05),与A组及C组比较亦无显著性差异(p>0.05)。B组明显高于D1-D3组(p<0.05),D4组与B组比较无显著性差异(t=1.305,p>0.05)。(2)尾矩对照组A、B、C组分别为1.25±0.46、2.41±0.75、1.28±0.46,B组明显高于A、C组(p<0.05),A组与C组之间无显著性差异(t=1.412,p>0.05)。实验组D1-D4组分别为1.27±0.47、1.26±0.45、1.25±0.45、2.36±0.77,D4组明显高于D1-D3组(p<0.05),D1、D2、D3组间无显著性差异(F=1.752,p>0.05),与A组及C组比较亦无显著性差异(p>0.05)。B组明显高于D1-D3组(p<0.05),D4组与B组比较无显著性差异(t=1.215,p>0.05)。(3)尾长对照组A、B、C组分别为1.04±0.30、3.47±0.71、1.06±0.39um,B组明显高于A、C组(p<0.05),A组与C组之间无显著性差异(t=0.912,p>0.05)。实验组D1-D4组分别为1.05±0.34、1.01±0.35、1.03±0.38、3.39±0.77um,D4组明显高于Dl-D3组(p<0.05), D1、 D2、D3组间无显著性差异(F=2.012,p>0.05),与A组及C组比较亦无显著性差异(p>0.05)。B组明显高于Dl-D3组(p<0.05),D4组与B组比较无显著性差异(t=1.105,p>0.05)。(4)姐妹染色单体交换数对照组A、B、C组分别为1.96±1.27、4.00±2.23、2.17±1.20,B组明显高于A、C组(p<0.05),A组与C组之间无显著性差异(t=1.412,p>0.05)。实验组D1-D4组分别为1.84±1.29、1.97±1.11、1.93±1.15、3.93±1.95,D4组明显高于Dl-D3组(p<0.05),D1、D2、D3组间无显著性差异(F=1.732,p>0.05),与A组及C组比较亦无显著性差异(p>0.05)。B组明显高于D1-D3组(p<0.05),D4组与B组比较无显著性差异(t=2.005,P>0.05)。结论1.当crocin浓度为0.625~2.5mg/ml时,淋巴细胞尾部DNA百分比、尾矩、尾长及组妹染色单体交换数与空白对照组(A)及阴性对照组(C)无显著性差异,提示该范围内crocin对正常儿童外周血淋巴细胞DNA无损伤作用:2.当crocin浓度为5mg/ml时,淋巴细胞尾部DNA百分比、尾矩、尾长及姐妹染色单体交换数均明显高于空白对照组(A)及阴性对照组(C),提示该浓度crocin对正常儿童外周血淋巴细胞DNA有损伤作用。第二部分:藏红花素对正常儿童外周血淋巴细胞DNA损伤后修复韵研究目的探讨藏红花素(crocin)对阿糖胞苷(cytarabine, Ara-c)损伤后的淋巴细胞有无DNA修复作用。方法无菌条件下用生理盐水配制crocin、阿糖胞苷(cytarabine, Ara-c)及维生素C(vitamin C, zel C)溶液,分A-E组:A组(crocin2.5mg/ml)、B组(crocin2.5mg/ml+Ara-c0.25mg/ml)、C组(zel C0.4mg/ml)、D组(Ara-c0.25mg/ml)、E组(zel C0.4mg/ml+Ara-c0.25mg/ml)。Ficoll密度梯度离心法提取正常儿童外周血淋巴细胞,将提取的淋巴细胞分别培养于以上各组的培养液中,培养72小时后分别收获细胞,行单细胞凝胶电泳实验观察淋巴细胞尾部DNA百分比(tail DNA%, TDNA).尾矩(tail moment, TM)、尾长(tail length,TL),行姐妹染色单体分化染色法测定姐妹染色单体交换数(SCE)。结果(1)淋巴细胞尾部DNA百分比A-E组分别为(6.13±2.12)%、(6.15±2.14)%、(6.10±2.13)%、(12.67±3.36)%、(6.14±2.14)%,各组间差异具有统计学意义(F=12.518,p<0.05)。A-C组及E组均明显低于D组(p均<0.05),而B组与E组比较,无显著性差异(p>0.05);(2)尾矩A-E组分别为1.25±0.46、1.28±0.45、1.24±0.45、2.41±0.75、1.22±0.45,各组间差异具有统计学意义(F=16.237,p<0.05)。A-C组及E组均明显低于D组(p均<0.05),而B组与E组比较,无显著性差异(p>0.05);(3)尾长A-E组分别为1.03±0.38、1.08±0.36、1.04±0.30、3.47±0.71、1.09±0.38umm,各组间差异具有统计学意义(F=11.971,p<0.05)。A-C组及E组均明显低于D组(p均<0.05),而B组与E组比较,无显著性差异(p>0.05);(4)姐妹染色单体交换数A-E组分别为1.93±1.15、2.33±1.41、2.17±1.20、4.00±2.23、2.21±1.39,各组间差异具有统计学意义(F=18.117,p<0.05)。A-C组及E组均明显低于D组(p均<0.05),而B组与E组比较,无显著性差异(p>0.05);结论0.25mg/ml Ara-c可造成淋巴细胞DNA损伤,而2.5mg/ml crocin与Ara-C共同作用于淋巴细胞时,淋巴细胞尾部DNA百分比、尾矩、尾长及姐妹染色单体交换数均较Ara-c单独培养时降低,提示该浓度crocin寸Ara-c损伤后的淋巴细胞存在DNA修复作用。
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