白藜芦醇抑制胃癌SGC-7901细胞株生长的机制研究

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目的:研究白藜芦醇对人胃癌SGC-7901细胞生长增殖的影响,进而探讨白黎芦醇抗肿瘤活性的相关机制。方法:体外常规培养人胃癌细胞SGC-7901, MTT法检测白藜芦醇和GW9662(PPAR-γ特异阻断剂)对SGC-7901细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪测定对细胞周期的影响,RT- PCR方法检测PPAR-γ、Cyclin D1、VEGF的mRNA表达,Western blot检测PPAR-γ蛋白的表达,免疫细胞化学法检测CyclinD1、VEGF蛋白表达的改变。结果: (1) MTT实验结果显示:用不同浓度(25, 50, 75, 100μmol/L)的白藜芦醇处理人胃癌SGC-7901细胞24、48、72h后,白藜芦醇呈时间、浓度依赖性地抑制胃癌SGC-7901细胞的生长,而在48h,不同浓度(25, 50, 75, 100μmol/L)的白藜芦醇+10μmol/L GW9662处理组与相同浓度的白藜芦醇组相比,其抑制率显著下降(P<0.05)。(2)流式细胞仪检测发现(0,50,100μmol/L)白藜芦醇作用48h后,细胞生长被阻滞在G1期,随着浓度增加,G1期细胞所占百分率增加,同时伴随着S期细胞比例减少,G2期指数无明显变化,而100μmol/L的白藜芦醇+10μmol/L GW9662处理组与100μmol/L的白藜芦醇组相比,抑制作用明显下降(P<0.05)。(3)胃癌SGC-7901细胞存在PPAR-γmRNA和蛋白的表达,白藜芦醇呈浓度依赖性的激活PPAR-γmRNA的转录。25, 50, 75, 100μmol/L白藜芦醇作用于胃癌细胞48h后,细胞中PPAR-γmRNA相对表达分别是空白对照组的122.2%,195.1%, 232.9%和277.1% (P<0.05),100μmol/L白藜芦醇+10μmol/L GW9662处理的癌细胞PPAR-γmRNA相对表达是空白对照组的261.1%,与100μmol/L的白藜芦醇处理组相比有显著差异(P<0.05)。而总体PPAR-γ蛋白的表达几乎没有变化。(4)胃癌SGC-7901细胞高水平表达Cyclin D1,白藜芦醇显著的抑制Cyclin D1的表达(P<0.05)。经25, 50, 75, 100μmol/L白藜芦醇处理48h后, Cyclin D1 mRNA抑制率分别为11.3%, 24.3%, 35.4%,59.5%;而100μmol/L白藜芦醇+10μmol/L GW9662处理组Cyclin D1 mRNA抑制率为40.7%。经0, 50, 100μmol/L白藜芦醇处理48h后, Cyclin D1蛋白相对灰度值分别为77.57±1.15,54.43±1.78 ,28.91±2.21,而100μmol/L白藜芦醇+10μmol/L GW9662处理组相对灰度值为40.56±1.84。100μmol/L白藜芦醇处理组和100μmol/L白藜芦醇+10μmol/L GW9662处理组相比,抑制作用有显著差异(P<0.05)。(5)胃癌SGC-7901细胞高水平表达VEGF,白藜芦醇显著的抑制VEGF的表达(P<0.05)。经25, 50, 75, 100μmol/L白藜芦醇处理48h后,VEGF mRNA抑制率分别为分别11.2%, 21.8%, 27.6%, 49.6%,而100μmol/L白藜芦醇+10μmol/L GW9662处理组VEGF mRNA抑制率为39.0%。经0, 50, 100μmol/L白藜芦醇处理48h后, VEGF蛋白相对灰度值为72.58±1.08, 48.51±0.96, 20.62±0.94,而100μmol/L白藜芦醇+10μmol/L GW9662处理组相对灰度值为33.49±1.01。100μmol/L白藜芦醇处理组和100μmol/L白藜芦醇+10μmol/L GW9662处理组相比,抑制作用有显著差异(P<0.05)。结论:白藜芦醇在胃癌SGC-7901细胞中部分的通过激活PPAR-γ抑制Cyclin D1、VEGF的表达,使癌细胞停留在G1期,抑制细胞的增殖。
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