【摘 要】
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目的:白内障术后残留的晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是后发性白内障的主要病理改变,其具体的分子机制尤其是基因表达的调控机
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目的:白内障术后残留的晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是后发性白内障的主要病理改变,其具体的分子机制尤其是基因表达的调控机制尚不十分清楚。研究表明,转化生长因子β2(transforming growth factorβ2,TGF-β2)是晶状体上皮细胞转分化过程最有效的诱导因子,在后发性白内障发病过程中发挥着重要作用。微小RNA(microRNAs)是一类非编码单链RNA,能在转录或翻译水平调节靶基因的表达,从而在细胞增殖、凋亡、分化、肿瘤发生以及机体代谢等生命过程扮演了重要角色。目前,microRNAs参与EMT调控成为研究的热点。本课题通过TGF-β2体外诱导人晶状体上皮细胞发生EMT,采用micro RNA调控技术,研究miR-184介导TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞EMT及其分子机制,为阻断TGF-β2诱导的人晶状体上皮细胞EMT生物学过程及后发性白内障的预防和治疗提供了新的思路。方法:体外培养人晶状体上皮细胞HLE-B3,使用不同浓度TGF-β2处理细胞后,采用细胞免疫荧光及western blotting法观察和分析晶状体上皮细胞中上皮细胞标志物E-钙粘连蛋白(E-cadherin)和间质细胞标志物波形蛋白(vimentin)等细胞转分化相关蛋白的变化,应用qRT-PCR法检测TGF-β2对细胞miR-184的表达影响。建立人晶状体上皮细胞EMT研究模型,采用脂质体介导的miRNA调控技术转染HLE-B3细胞,通过qRT-PCR法检测转染miR-184 mimic和miR-184 inhibitor后细胞mi R-184的表达。应用激光共聚焦及western blotting等方法观察上调和下调miR-184基因对TGF-β2诱导的人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化及靶基因bin3表达影响。结果:外源性TGF-β2成功诱导体外培养人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化。miRNA调控技术能够在基因水平调控TGF-β2诱导的人晶状体上皮细胞mi R-184的表达,并且能够影响TGF-β2诱导的人晶状上皮细胞上皮-间质转分化相关蛋白及靶基因bin3的表达。结论:miR-184是影响TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞间质转分化过程的一种重要基因,下调miR-184的表达能够抑制TGF-β2诱导的晶状体上皮细胞间质转分化,其分子机制可能是在转录和翻译水平抑制靶基因bin3表达。
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