【摘 要】
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新型冠状病毒肺炎（Corona Virus Disease 2019,COVID-19）是由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染导致的疾病,临床表征为体温异常、鼻塞、流涕、四肢无力、腹泻、味觉和/或嗅觉丧失等,重症患者可能发展为急性呼吸窘迫综合征甚至死亡。SARS-CoV-2与其他冠状病毒一样,是一种具有外膜包裹的（+）ssRNA病毒,其形状呈近圆形,颗粒直径为50-200 nm,拥有4个结构
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新型冠状病毒肺炎（Corona Virus Disease 2019,COVID-19）是由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染导致的疾病,临床表征为体温异常、鼻塞、流涕、四肢无力、腹泻、味觉和/或嗅觉丧失等,重症患者可能发展为急性呼吸窘迫综合征甚至死亡。SARS-CoV-2与其他冠状病毒一样,是一种具有外膜包裹的（+）ssRNA病毒,其形状呈近圆形,颗粒直径为50-200 nm,拥有4个结构蛋白,分别为S蛋白、M蛋白、E蛋白和N蛋白。作为第七种发现的人冠状病毒,由其引起的COVID-19传染病已成为史上致死人数最多的传染病之一。随着疫情范围的扩大和感染人数的不断上升,应疾病诊疗和疫情防控的需求,针对新冠病毒的诊断试剂亟需开发。本论文基于RT-qPCR技术和侧流层析技术建立了 COVID-19分子及免疫学诊断方法。在分子诊断体系的构建中,我们采用基于以水解TaqMan探针作为荧光信号的RT-qPCR技术,以SARS-CoV-2的ORF1ab基因和N基因作为检测靶点、人类RNaseP基因作为内参设计特异性扩增引物和TaqMan探针,进行多重荧光PCR扩增。在建立SARS-CoV-2装甲病毒作为质控品并在此基础上对核酸扩增体系优化及性能评估。另外,我们采用了纳米金侧流层析技术建立了 SARS-CoV-2抗原及抗体的检测方法。以柠檬酸三钠还原法制备纳米金溶液,对侧流层析试纸条进行了处理和组装,在此基础上我们对抗原抗体的标记条件进行摸索和性能的测试。研究结果表明,核酸检测试剂检测灵敏度可以达到500 copies/mL,抗原抗体检测试纸对SARS-CoV-2 N蛋白和IgM的灵敏度可达100 pg,对IgG的灵敏度可达50 pg,核酸检测试剂盒抗原抗体检测试纸均具有良好的性能。
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