自然界中木质素的降解主要是通过丝状真菌，尤其是白腐菌的分解作用来完成的。白腐菌降解木质素，是通过其分泌的酶的作用来实现的。白腐菌所分泌的木质素降解酶主要有3种，即木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶和漆酶。漆酶是一种含铜的多酚氧化酶，与其它氧化酶相比具有更大的实际应用价值。漆酶来源于植物、真菌和细菌，具有特殊的催化性能和广泛的作用底物，在木素降解、生物制浆、生物漂白、环境保护、生物传感器制作、有机合成、食品及饮料加工等领域具有广阔的潜在的应用价值和应用前景。 本论文首先以本实验室分离的白腐菌为出发菌，采用原生质体融合和紫外线照射诱变选育漆酶高产菌株，诱变菌株的漆酶活力达172901U/L，比出发菌株高约7．5倍，经过传代5代，遗传性状稳定。固体稻草发酵添加微量元素100-200mg/L，可提高菌株的产漆酶能力。 诱变菌株在木屑麸皮培养基中培养9-10个星期，长出子实体，子实体菌盖有粗毛，呈白色到浅粉红色，肉质为白色，干后为革质，并观察了供试菌担孢子形态，孢子印为白色，担孢子呈椭圆形，无色，表面平滑，明显有缘囊状体及侧囊状体。比较氯化苄法、饱和酚法和CTAB(十六烷基三乙基溴化氨)法提取供试菌的总DNA，以效果最好的CTAB法总DNA为模板，扩增诱变株菌株的18s rDNA序列，与野生革耳菌Panus rudis的同源性最高，为99％。结合子实体和担孢子形态及菌株18s rDNA序列比对结果可鉴定，本实验室诱变选育的菌种为贝壳状革耳菌P.conchatus。通过进化树分析可知，P.conchatus与P.rudis的亲缘关系最近。～ 通过XPS(X-射线光电子能谱)分析可知，竹子经过贝壳状革耳菌P. conchatus处理25d，表面元素C，O，N的比例发生了变化，化学结构也产生变化。未经生物处理的竹子表面O/C比为0．369，生物处理后O/C为0.383，推断竹子的部分木素被氧化降解，碳水化合物的相对含量增加。C-C、C-O含量减少，C-N、C=O含量增加，由此推断经过P. conchatus处理木素的C-C发生断裂，C-O被氧化为C=O，生物体中的蛋白质使竹子表面C-N增加。采用AFM(原子力显微镜)、LSCM(激光共聚焦扫描显微镜)和SEM(扫描电子显微镜)观察P.conchatus处理前后竹子的形貌可得出，白腐菌处理去除了竹子部分木素，竹子表面变粗糙，细胞壁上出现了孔洞，细胞问出现凹坑，纤维结构变疏松，有利于后续化学处理药液的渗入和残余木素的脱除，减少化学药品的用量，减轻环境污染负荷。P.conchatus固体培养产生的漆酶用于生物漂白，取得较好的效果。酶处理荻苇浆、麦草浆和芦苇浆，LQP浆和OLQP浆的白度达比未经漆酶处理的高，OLQP浆白度分别为83.2％ISO、81.8％ISO和84.1％ISO，Kappa值显著降低，粘度变化不大。本研究为P. conchatus及P.conchatus漆酶的应用奠定了基础。研究了P.conchatus液体培养合成漆酶的条件，探讨了不同土豆培养基、碳源、氮源、碳氮比、微量元素、诱导剂和综合因素对漆酶产生及菌体生长情况的影响。结果表明，在土豆汁、土豆麦麸和土豆豆粉培养基中静置培养23d，P. conchatus的漆酶酶活出现2个高峰，其中在土豆麦麸培养基中培养的效果最好。以葡萄糖为碳源，漆酶的酶活最高，其后依次为麦麸、淀粉、羧甲基纤维素和蔗糖；以麦麸为碳源，菌体生物量最大，接下来是淀粉、葡萄糖、羧甲基纤维素和蔗糖，菌体的生长与漆酶酶活不呈正相关关系。以酒石酸铵为氮源，最有利于漆酶的合成，接着是蛋白胨、豆粉、牛肉浸膏和酵母膏；以酵母膏为氮源，菌体生长最好，接下来依次是酒石酸铵、豆粉、蛋白胨和牛肉浸膏。高氮低碳条件下漆酶的酶活较高，高碳条件有利于菌体生长。2，2-连氮-二-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)对P.conchatus产漆酶的诱导作用最好，其次是愈创木酚，接着是稻草粉和藜芦醇，Tween80对P. conchatus漆酶的产生有抑制作用。通过正交实验综合考察了碳源葡萄糖、氮源酒石酸铵、大量元素和微量元素4个重要的营养因素对漆酶合成和菌体生长的影响，得到最适培养条件为葡萄糖10g/L，酒石酸铵5g/L，大量元素为基础培养基的3倍，微量元素20ml/L。葡萄糖是影响菌体生长的主要因素。 经过硫酸铵沉淀、超滤、DEAE-Cellulose离子交换层析，再经Sephadex G-75分子筛分离纯化后，得到P. conchatus纯漆酶，用SDS-PAGE凝胶电泳分析得知漆酶蛋白分子量为56KDa左右。通过氨基酸测序分析，得到P.conchatus漆酶N-端氨基酸序列，和P.rudis漆酶前15个N-端氨基酸序列的同源性为100％。采用3-Full RACE PCR技术，以Invitrogen RNA提取试剂盒提取的总RNA为模板，扩增P conchatus漆酶基因序列，通过比对得知漆酶基因与P.rudis漆酶的同源性为99％，与其它漆酶基因整体同源性不高。该漆酶基因由1437bp完整ORF(开放阅读框)构成，处于22-1457位，编码479个氨基酸残基组成的成熟蛋白。 本文的研究为今后P.conchatus漆酶基因结构的研究、漆酶的异源表达和基因工程菌的构建奠定了一定的基础，为漆酶在生物制浆、生物漂白和废水处理等领域的应用提供理论支持。