核黄素(riboflavin)是辅因子FAD和FMN的前体物,人和动物除肠道细菌能少量合成外需从食物中获取,而许多微生物如革兰氏阴性致病细菌、病原酵母由于缺乏有效摄取体系,依赖自身内源合成。因此核黄素的生物合成可作为抑菌物质筛选新靶标。本研究旨在从土壤中活体筛选出能抑制核黄素生物合成的菌株,体外验证其抑制性能并进行菌种鉴定,确定活性物质合成的最优培养基和最优发酵条件,研究结果如下:(1)采用活体筛选模型,以核黄素产生菌假丝酵母(Candida famata)为指示菌,琼脂移块法初筛,管碟法和摇瓶发酵法复筛,获得一株能抑制假丝酵母核黄素合成的菌株Q210,对单位菌体量酵母的核黄素合成抑制率达57.63%。(2)构建假丝酵母核黄素体外酶合成反应体系,对菌株Q210抑制核黄素合成进行体外验证,结果显示菌株Q210活性产物对核黄素合成抑制率达93.62%。对该体系反应条件进行优化:酵母粗酶液最适反应温度为29℃,最适反应时间为30 min,置-30℃冰箱可储存45 d,酶活力保持在91.75%以上。(3)对菌株Q210进行形态、生理生化研究,结合16S rDNA序列分析,确定该菌为Bacillus subtilis。(4)对菌株Q210活性产物的理化性质进行研究。研究表明,该活性物质为胞内水溶性产物,在20℃~90℃及pH 2~12范围内能较稳定存在,置4℃冰箱可保存10天活性基本不变。蛋白酶K试验显示活性物质为多肽类或蛋白类物质。(5)对菌株Q210的基础发酵培养基和发酵条件进行研究。结果发现:菌株Q210最佳基础发酵培养基为改良碱性PDA培养基,最佳发酵时间为4 d,发酵条件正交试验优化结果为菌龄为60 h、装液量为40 mL、发酵初始pH为8.0和接种量为2%。