论文部分内容阅读
目的:观察南瓜蛋白(cucurmosin,CUS)体外对人胰腺癌细胞株SW1990的增殖抑制及诱导凋亡作用;建立NOD-SCID小鼠原位移植瘤模型,观察南瓜蛋白体内对胰腺癌SW1990的增殖抑制作用;探讨其增殖抑制及诱导凋亡的可能机制,为南瓜蛋白可能的抗胰腺癌临床应用提供理论基础及实验依据。方法:1.MTT法检测南瓜蛋白体外对胰腺癌SW1990细胞的增殖抑制作用。2.建立NOD-SCID小鼠原位移植瘤模型,体内观察南瓜蛋白对移植瘤的生长抑制作用。3.流式细胞仪检测南瓜蛋白对SW1990细胞生长周期的影响。4.透射电镜观察南瓜蛋白作用后SW1990细胞超微结构的改变。5.Annexin V-FITC法检测南瓜蛋白作用后SW1990细胞的凋亡率。6. Western blot法检测南瓜蛋白作用后Caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白表达。结果:1.不同浓度(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00及80.00 mg/L)南瓜蛋白作用不同时间(24、48、72h)后,随着浓度的增加及作用时间的延长,细胞的增殖抑制率逐渐增加。南瓜蛋白作用于胰腺癌SW1990细胞24、48、72 h后,其半数抑制浓度(IC50)分别为(49.12±2.35) mg/L、(19.33±1.13) mg/L、(6.47±0.59) mg/L,提示南瓜蛋白以时间?剂量依赖性方式抑制胰腺癌细胞生长。2.NOD-SCID小鼠原位移植瘤模型制作成功后,给小鼠注入不同剂量(0.50、1.00、2.00 mg/kg)南瓜蛋白作用5周,肿瘤的生长抑制率(与生理盐水阴性对照组比较)分别为33.58%、43.75%、58.36%,提示南瓜蛋白体内可抑制胰腺癌SW1990细胞生长,并呈剂量依赖性。3.不同浓度(0、2.50、10.00、40.00mg/L)南瓜蛋白作用SW1990细胞72h后,随着药物浓度增加,处于G0/G1期的细胞比率分别为(40.79±4.05)%、(45.39±3.63)%、(52.37±4.76)%、(66.46±5.02)%,呈逐渐增多;处于S期细胞比率分别为(49.87±3.98)%、(47.06±3.12)%、(41.19±2.85)%、(22.76±1.91)%,呈逐渐减少,提示南瓜蛋白可能通过降低S期和G0/G1期的细胞比率,延缓细胞由G1期向S期过渡,从而抑制细胞增殖。4.胰腺癌SW1990细胞在空白培养液中培育72h后可见细胞核大、深染,核质比例失常,出现双核仁。40.00mg/L的南瓜蛋白作用72h后可见细胞凋亡较明显,表现为细胞膜结构较完整,细胞质疏松,细胞核边集,核膜核仁破碎,核质浓缩,出现凋亡小体。5.不同浓度(0、2.50、10.00、40.00 mg/L)南瓜蛋白作用72h后,细胞的凋亡率分别为(0.30±0.11)%、(18.93±1.06)%、(28.00±2.07)%、(49.93±3.25)%,提示南瓜蛋白能有效的诱导胰腺癌SW1990细胞的凋亡,并呈剂量依赖性。6.不同浓度(0、2.50、10.00、40.00 mg/L)南瓜蛋白作用72 h后,Caspase-3、Bax的蛋白表达水平逐渐上升,Bcl-2蛋白表达水平逐渐下降,呈剂量依赖性。结论:1.南瓜蛋白体内外对胰腺癌SW1990细胞均有增殖抑制作用。2.南瓜蛋白可能通过调节SW1990细胞的生长周期,降低S期和G0/G1期的细胞比率,延缓细胞由G1期向S期过渡,从而抑制胰腺癌SW1990细胞增殖。3.南瓜蛋白可能通过下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,使Bcl-2/Bax比例下降,最终激活下游的Caspase-3效应分子,诱发胰腺癌SW1990细胞凋亡,从而抑制胰腺癌SW1990细胞增殖。