论文部分内容阅读
本文以传统中药地锦草为研究对象,收集了16个不同产地、不同批次的样品。地锦草为大戟科植物地锦Euphorbia humifusa Willd或斑地锦Euphorbia maculata L.的干燥全草,具有清热解毒、凉血止血之功效。本文对地锦草的化学成分,药材及其片剂的质量控制方法进行了研究,并建立了地锦草药材的HPLC指纹图谱。采用溶剂法和各种色谱技术对地锦草的化学成分进行研究,分离并鉴定了8个化合物,分别为:芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(E1)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(E2)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(E3)、槲皮素(E4)、短叶苏木酚(E5)、槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷(E6)、紫云黄芪苷-6"-O-没食子酸酯(E7)和槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→6)-β-D-吡喃半乳糖苷(E8)。其中,化合物E3,E6,E7和E8均为首次从该植物中分离得到。建立了同时测定地锦草药材中槲皮素、木犀草素和山柰酚的高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil C18柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(52:48,v/v),检测波长360nm,线性范围分别为4.000~80.00μg·mL-1(r=0.9999),0.848~16.96μg·mL-1(r=0.9998)和2.720-54.40μg·mL-1(r=0.9999),回收率分别为98.2%(RSD=1.4%),100.3%(RSD=2.3%)和101.1%(RSD=1.6%)。建立了测定地锦草药材中没食子酸的高效液相色谱法,色谱柱为Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(10:90,v/v),检测波长272nm,线性范围为1.75~35.0μg·mL-1(r=0.9996),回收率为99.9%(RSD=1.8%)。建立了同时测定地锦草药材中E6、E2、E8、E1、E7和E3的高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-四氢呋喃-0.1%磷酸溶液(22:6:1:71,v/v/v/v),检测波长330nm,线性范围分别为1.440~28.80μg·mL-1(r=0.9999),5.000~100.0μg·mL-1(r=0.9999),5.500~110.0μg·mL-1(r=0.9999),16.20~324.0μg·mL-1(r=0.9998),15.00~300.0μg·mL-1(r=0.9997)和5.000~100.0μg·mL-1(r=0.9997),回收率分别为100.5%(RSD=2.2%),102.0%(RSD=1.8%),98.0%(RSD=2.0%),100.7%(RSD=2.2%),101.2%(RSD=2.0%)和100.8%(RSD=3.0%)。采用Diamonsil-C18柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液系统进行梯度洗脱,检测波长为330nm,建立了地锦草药材的HPLC指纹图谱分析方法,经方法学验证,符合指纹图谱要求。对16批不同来源的地锦草样品进行指纹图谱的测定,获得了16个共有色谱峰。用系统聚类分析法将药材分类,结合分类结果,以相似度软件生成指纹图谱共有模式,分别以夹角余弦、相关系数和欧氏距离为测度,计算样品与共有模式的相似度。采用和地锦草药材相同的色谱条件,对地锦草片中槲皮素、木犀草素和山奈酚的含量进行了同时测定,线性范围分别为3.00~60.0μg·mL-1(r=0.9999),4.48~89.6μg·mL-1(r=0.9998)和0.44~8.80μg·mL-1(r=0.9998),回收率分别为100.1%(RSD=1.0%),100.5%(RSD=1.1%)和98.8%(RSD=1.5%)。采用和地锦草药材相同的色谱条件对地锦草片中没食子酸的含量进行了测定,线性范围为1.75~35.0μg·mL-1(r=0.9996),回收率为100.3%(RSD=2.2%)。