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苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt）是一种在土壤中广泛分布的革兰氏阳性细菌。在其生长的过程中,会向胞外分泌一些小分子代谢物。如苏云金素（thuringienisn,简称Thu）和双效菌素（Zwittermicin A,简称ZwA）等。它们对许多农业害虫都具有毒杀活性,有着广阔的应用前景。苏云金芽胞杆菌中华亚种（B.thuringiensis subsp.chinensis）CT-43菌株是本室分离得到的一株高产苏云金素的野生菌株。本研究将CT-43在LB培养基中培养至指数期末期,采用有机溶剂萃取法提取上清液中的苏云金素。HPLC（Higher pressure liquidchromatogram）检测结果显示上清萃取液含两个主峰。经HPLC-MS（HPLC-Massspectrometry）进一步分析鉴定,保留时间为7 min的峰为苏云金素特征吸收峰,保留时间为6 min左右的峰为未知代谢物吸收峰,本研究将其命名为Tox-x。通过液质联用分析,得出其分子量是677。通过与目前己报道的苏云金杆菌所产代谢物进行比较,确定Tox-x为一新型代谢物。本研究进一步以秀丽小杆线虫为目标害虫对其进行活性检测,发现Tox-x对秀丽小杆线虫具有毒杀活性,原液稀释6.25倍的线虫致死率达到90%。本研究进一步通过确立培养基配方,补料成分及补料时间,分别得到产高纯度苏云金素的发酵工艺和产高纯度Tox-x的培养基。研究结果如下:将CT-43菌株在G培养基中培养至第20 h,同时补柠檬酸钠和葡萄糖至终浓度分别为2.0g L-1和16 gL-1,再继续发酵32 h,然后采用有机溶剂萃取法提取上清液中的苏云金素。HPLC检测结果显示,此发酵工艺制备的苏云金素峰面积占初提物总峰面积的74.84%,比用LB培养基发酵所得提取物中苏云金素占总峰面积的29.85%提高了一倍多。通过改变LB培养基中各营养物质的浓度,得到产高纯度的Tox-x的LB-1培养基。其配方是:酵母提取物浓度为18 g L-1,胰蛋白胨浓度为15 g L-1,氯化钠浓度为10 g L-1。将CT-43在LB-1培养基中发酵32 h,然后将发酵上清萃取液进行HPLC分析,结果显示LB-1培养基发酵所得提取物中Tox-x峰面积占初提物总峰面积66.59%,比用LB培养基发酵所得提取物中Tox-x占总峰面积的31.76%提高了两倍多。本研究同时将本室保存的6株CT-43质粒消除突变株进行了产苏云金素或Tox-x的HPLC检测,研究发现CT-43-7只能产生高纯度的苏云金素,不产Tox-x;而突变株CT-43-55只产Tox-x,而不产苏云金素。所以可以用相应的突变株来提纯苏云金素和Tox-x。