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研究背景干细胞移植是目前超过50多种疾病,如恶性血液肿瘤、自身免疫性疾病和免疫缺陷性疾病等的主要治疗手段之一。造血干细胞(Hematopoietic Stem Cell,HSC)移植是干细胞移植临床应用最久、最广泛和最成功的例子。对于某些恶性血液病,如慢性淋巴细胞白血病(Chronic Lymphocytic Leukemia,CLL),对化疗无效的弥漫性大B淋巴瘤(Diffuse Large B Cell Lymphoma,DLBCL)等,异体(或异基因)HSC移植仍然是唯一有希望的治愈手段。HSC移植后的存活和功能是治愈的关键。CD47作为一种几乎表达于所有细胞表面的跨膜蛋白,对造血干细胞的存活和功能具有重要的生物学意义。一方面,作为配体,CD47可以结合巨噬细胞表面的SIRPα,通过CD47-SIRPα信号通路抑制巨噬细胞对造血干细胞的吞噬。小鼠研究提示造血干细胞在动员剂的刺激下上调CD47的表达,降低被巨噬细胞吞噬的风险,嗜血细胞综合征患者HSC表面CD47表达下降导致HSC被巨噬细胞吞噬,全血细胞减少。另一方面,CD47作为细胞表面受体也在调控细胞凋亡、增殖和损伤等方面发挥重要的调节作用。例如,TSP1-CD47信号通路可诱导细胞凋亡,并且CD47的缺失会引起完全分化的成体细胞产生多能干细胞的特征。这说明CD47的表达和CD47相关的信号通路对移植后HSC的存活和功能都具有重要意义。虽然研究发现天然的CD47存在4种不同的亚型,但对于CD47不同亚型的表达对细胞命运影响的研究有限。因此,除了CD47表达之外,CD47的亚型也可能在HSC移植过程中发挥作用。研究目的探讨全身电离辐射后小鼠骨髓造血干/祖细胞CD47表达水平的变化。检测部分造血系细胞的CD47亚型表达,通过细胞生物学和分子生物学的方法研究CD47的表达和CD47亚型对造血干细胞移植重建的影响,为阐明CD47在造血干细胞移植免疫中的功能提供理论依据。研究方法1.用非致死剂量X-ray对小鼠全身辐照,在辐照后不同时间点检测小鼠骨髓造血干/祖细胞的比例及CD47表达变化。2.提取骨髓造血干细胞及骨髓、脾脏、外周血单个核细胞等成熟造血细胞的RNA,鉴定其表达的CD47亚型种类及相对表达量。3.分离CD47 KO小鼠骨髓造血干细胞,通过慢病毒感染的方法使其分别表达小鼠CD47亚型-1及亚型-5,移植给致死剂量辐照的CD47KO小鼠后,在不同时间点检测外周血CD47亚型的表达,以及不同免疫细胞的重建。研究结论1.与成熟造血系细胞相比,小鼠造血祖细胞高表达CD472.全身辐照后,LSK造血干细胞短期内CD47表达量上调,长期储备量下降。3.部分成熟的造血系细胞,如骨髓细胞,脾细胞,外周血单个核细胞(PBMC)表达CD47的所有亚型,主要以2型为主;部分非成熟的造血系细胞,如LSK造血干细胞表达CD47的所有亚型,以3,4型为主,1型的相对表达量高于成熟造血细胞。