目的: 掌握应用胶原酶溶液作肝脏原位循环灌注,分离、纯化肝细胞的技术;通过同种异体肝细胞经脾脏移植,探讨对于用D-氨基半乳糖诱导的急性肝功能衰竭(Acute liver failure ALF)大鼠治疗作用的机理。 方法: 急性药物性肝衰模型:10%D-氨基半乳糖溶液按1.6g/kg一次性大鼠腹腔注射;用三种不同的液体对肝脏原位灌注,先用含EDTA的D-Hanks液,再用D-Hanks液,最后用胶原酶溶液,分离、纯化的肝细胞制备成肝细胞悬液,浓度为4×107/ml,2小时内经脾脏移植;56只用D-氨基半乳糖诱导急性肝衰大鼠,24小时随机分为两组。Ⅰ组行脾内移植0.5ml(2×107肝细胞)肝细胞悬液,Ⅱ组脾内注入等量盐水,分别于术后6小时、12小时、24小时、48小时观察肝内肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor HGF)、肝功能和肝脏HE染色的变化。结果: 分离纯化的肝细胞悬液细胞总量为2-2.5×108/只,经胎盘兰染色鉴定其活率在95%以上;肝细胞移植组与对照相比较,肝内HGF在24小时内移植组高于对照组(P<0.05),在12小时达高峰,48小时二者无明显区别(P>0.05);肝功能测定,行肝细胞移植后,在12小时内移植组谷丙转氨酶和总胆红素较对照组高(P>0.05),二者差别均有统计学意义,24小时后移植组逐渐恢复正常。各组血清白蛋白的变化不大,二者无统计学意义(P>0.05)。结论: 用上述方法分离的肝细胞活率较高,达95%以上;同种异体肝细胞移植在早期24小时内可刺激受体HGF的产生,从而促进受体肝再生肝功能的恢复。