论文部分内容阅读
背景:脑血管病是人类的常见病和多发病,其以较高的发病率、致残率和病死率成为当前严重威胁人类健康的一类重要疾病,其中以缺血性脑血管病为最常见,但由于缺血后原发性和继发性损伤机制尚未完全明了,所以它一直是各国研究的重点和难题。目前,对于脑缺血/再灌注损伤机制的研究主要集中在氧自由基、兴奋性氨基酸、细胞内钙超载、线粒体损伤、炎症反应和细胞凋亡等方面,其中,再灌注时的炎症反应促进了继发性脑损伤,是脑缺血/再灌注损伤的主要原因之一。 一氧化氮(nitricoxide,NO)是普遍存在于脊椎动物各种细胞中的一种生物介质,是细胞间信息传递的重要调节因子,它作为第二信使和神经递质有着各种不同的功能。生理状态下,一氧化氮(NO)作为一种可弥散的神经介质或信使物质在中枢神经系统(CNS)中起着多方面重要作用。同时NO也是一种自由基和细胞毒性物质。有研究表明NO参与了CNS中神经元的缺血缺氧性损害过程。NO参与机体生理及病理过程,对疾病发生及发展的影响一直是医学界关注的焦点。由于NO半衰期极短,在组织中难于直接测量,它的作用与一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)水平密切相关。NADPH-d酶组织化学技术可简便而可靠地标记NOS神经元。在大鼠的大脑皮质、海马及纹状体等区域中,含nNOS的神经元占该区域所有细胞的1%~2%,它们散在性地分布在整个区域。 红景天为景天科属多年生草本或亚灌木植物,红景天生长环境极其恶劣,缺氧、低温干燥、狂风、强紫外线照射、昼夜温差大,故其已从遗传上适应高寒多变的恶劣环境,具有很强的生命力和特殊的适应性。是珍稀药用植物之一,被誉“高原人参”。红景天可全草入药,在我国古代就得到广泛应用,在《本草纲目》《神农本草经》等医书中均有记载,认为红景天具有“祛邪恶气,补诸不足”之功。红景天化学成分研究,国内外进行化学成分研究及成分预测试的品种约20个,红景天的药理实验研究表明,红景天提取物或其有效成分具有抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射以及对神经系统、心血管系统、免疫系统的显著作用[4]。 目的:在低氧环境下研究红景天对大鼠脑缺血的神经保保护作用,为其治疗脑缺血提供药理依据。 方法:在亚高原(海拔2200米)采用红景天给予灌胃(治疗组),生理盐水给于灌胃(对照组),采用正常饲养(正常组)。在高原(海拔3600米)采用红景天给予灌胃(治疗组),生理盐水给于灌胃(对照组),采用正常饲养(正常组)。 1、亚高原和高原各对照组(n=6)每日给2ml/只的生理盐水,亚高原和高原各治疗组(n=6)每天灌胃相同剂量红景天制剂2ml/只,连续灌注30天,采用常压密闭缺氧,将大鼠放入1100ML广口瓶内,旋紧瓶塞,并涂以凡士林密封,与对照组相比,以实验动物大鼠从缺氧到死亡过程中有烦躁、紫绀、呼吸急促和抽搐等症状,以大鼠抽搐挣扎后突然瘫软并停止呼吸为死亡标准。记录大鼠存活时间。 2、亚高原和高原各治疗组大鼠(n=10)每天灌胃相同剂量红景天制剂2ml/只,连续灌胃30天后,亚高原和高原各正常组(n=10)正常饲养30天,亚高原和高原各对照组(n=10)每日给同量的生理盐水,造模30天后应用二血管阻塞法(2-VO)建立模型,具体操作方法如下:大鼠称重,用10%的水合氯醛(0.7mL/100g)腹腔麻醉大鼠后,仰卧位固定于手术台上,颈部剪毛,碘伏消毒,正中矢状位依次切开皮肤、皮下组织和颈阔肌,分开胸锁乳突肌和胸骨舌骨肌,分离、显露两侧颈总动脉(commoncarotidarte,CCA),并用动脉夹夹闭,1小时后解除动脉夹,经左心室插管灌注。生理盐水250ml(28℃)快速灌注至肝脏颜色为苍白后,再用4%多聚甲醛固定液200ml(4℃)缓慢灌注,持续40min,取脑在上述固定液中固定2-4小时后移入20%蔗糖多聚甲醛溶液中4℃过夜至组织沉底。在操作过程中保持恒温,对照组手术过程与治疗组一致(n=10),正常组(n=10)正常饲养30天,未做任何处理。采用HE染色和尼氏染色观察脑组织的形态学变化;NADPH-d组织化学染色方法标记NOS,并进行定量分析。 结果: 1.红景天能明显延长大鼠在密闭缺氧环境下的存活时间。 大鼠从缺氧到死亡过程中有烦躁、紫绀、呼吸急促和抽搐等症状,以大鼠抽搐挣扎后突然瘫软并停止呼吸为死亡标准。亚高原组、高原组的存活时间(分钟)分别是:亚高原(海拔2200米)药物组为24.53,对照组为22.31;高原(海拔3600米)药物组18.01,对照组15.66。从实验结果说明红景天能明显延长大鼠在密闭缺氧环境下的存活时间。 2.在低氧环境下红景天对大鼠脑缺血的神经细胞有保护作用。 2.1、NISSL染色结果正常新皮质细胞排列整齐,形态完整,轴突较长而完整,3、5、6层,细胞大而圆,尼氏体颜色较深。对照组新皮质3、5、6层细胞排列紊乱,形态完整的锥体细胞较少,已失去正常的细胞排列方式,细胞体积变小,胞核变形呈三角形,细胞皱缩,结构不清,尼氏体淡染,且这种改变随海拔的增高改变越明显。治疗组细胞形态基本正常,存在部分细胞排列紊乱的情况。有少许细胞中有棕色颗粒, 2.2、HE染色结果正常新皮质细胞层次清楚,细胞形态正常,排列整齐、分布均匀、形态完整、胞浆分布均匀、呈均匀鲜亮红色、胞核呈圆形或椭圆形,有完整的核膜和清晰的核仁,呈鲜亮蓝色;对照组新皮质组织疏松而水肿明显,残存细胞多无完整的细胞结构,空泡样变明显,细胞层次不清,体积变小,胞浆内出现空泡;高海拔区缺血组大脑皮质深部组织疏松而水肿明显加重,分布不均匀,细胞固缩呈三角形,胞浆嗜伊红,细胞核固缩深染,核仁消失。细胞周围及间隙增宽,水肿明显。治疗组新皮质组织水肿明显好转,细胞层次清楚,细胞体积明显大于缺血组。 2.3、NADPH-d染色结果正常组新皮质内分布着少量的NADPH-d阳性细胞,占总数量的2%,胞体较大,其突起伸入颗粒层,染色较深。治疗组大脑皮质区的阳性细胞,数量和着色与正常组基本一致,细胞突起明显,染色较深。对照组新皮质区阳性细胞为圆形或椭圆形的中小型细胞,突起短小或缺如,染色中等到偏淡,数量较多。