肿瘤的侵袭转移是肿瘤治疗失败的主要原因，也是目前肿瘤治疗所面临的主要困难和挑战。70年代以来，人们对肿瘤的发生、增殖、浸润和转移机制的认识有了质的飞跃，研究证实恶性肿瘤的增殖、侵袭和转移与肿瘤诱导的新生血管生成(angiogenesis)密切相关。从抑制肿瘤的血管生成、切断肿瘤细胞的营养供应和转移途径等方面开展的抗肿瘤血管新生治疗已成为近年肿瘤生物治疗中一个十分引人注目的领域，寻找高效的肿瘤血管生成抑制剂已成为当务之急。 KDR(Kinase insert domain-containing receptor，VEGFR一2)作为血管内皮细胞生长因子主要受体之一，在介导VEGF的内皮细胞增殖、迁移、分化、微管形成、血管通透性增加等一系列生物活性中发挥重要作用。从而VEGF／KDR信号传导途径被认为在肿瘤相关的血管新生过程中起到关键作用。通过制备KDR酪氨酸激酶受体抑制剂，阻断VEGF／KDR的相互作用，可以抑制肿瘤相关血管新生，最终达到抑制肿瘤生长、转移的目的。 KDR属酪氨酸蛋白激酶第Ⅲ亚型，在其7个免疫球蛋白样的胞外区中，区域Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是配体结合所必需的。其中区域Ⅱ和区域Ⅲ对与VEGF的相互作用提供较大贡献。缺失区域Ⅲ会引起KDR与VEGF结合的亲和力下降1000倍，因此说明区域Ⅲ尽管未必直接参与结合配体，但在VEGF／KDR相互作用中发挥关键作用。 在本研究中，我们直接针对在VEGF／KDR相互作用中发挥关键作用的KDR胞外Ⅲ区，制备单克隆抗体，旨在通过筛选，制备具有抑制活性的抗KDR中和抗体，通过阻断VEGF／KDR的相互作用，达到抑制肿瘤血管新生，抑制肿瘤生长、转移的目的。 我们首先从人脐静脉内皮细胞中克隆到KDR胞外Ⅲ区基因，通过酶切、连接，将其插入含有碱性磷酸酶(phoA)启动子和引导肽stⅡ的分泌型表达载体pAYZ，在大肠杆菌16C9中获得了高效分泌可溶性表达。采用三角瓶摇瓶培养，表