圆口铜鱼(Coreius guichenoti),隶属于鲤形目(Cytcriniformes)、鲤科(Cyprinidae)、鮈亚科(Gotiongiae)、铜鱼属(Coreius),是一种习惯在水流湍急的江河中栖息的河道洄游鱼类,常在岩礁众多的深潭中成群出现,曾是我国长江上游江段的主要优势物种和重要经济鱼类。然而,近年来,由于水电工程设施建设,长江流域生态环境改变、人类无节制的捕捞对圆口铜鱼的繁殖、生长造成了破坏性的影响,种群数量逐年下降,渔获物中幼龄或低龄鱼所占比重较大。是为长江上游珍稀特有鱼类保护区指标性物种之一,其保护问题亟待解决。开展增殖放流工作对保护珍稀鱼类至关重要,实现亲鱼的人工驯养、规模化化繁育则是增值放流的充分条件。目前,圆口铜鱼人工驯养繁殖圆满成功,已攻克该物种保护的关键技术难题,但亲鱼难捕获、养殖亲鱼数量少,雌雄配子发育不同步,雄鱼精液量少等问题制约了圆口铜鱼的规模化繁育。本研究通过对圆口铜鱼精液渗透压、不同渗透压下精子活力、精子4℃低温保存稀释液及不同抗冻剂下圆口铜鱼精液超低温冷冻保存效果的研究,旨在探索影响精子活力的因素和适宜圆口铜鱼精子保存的方法,以期为圆口铜鱼人工繁育、精子超低温冷冻保存提供基础数据。研究内容及主要研究结果如下:1.不同渗透压对圆口铜鱼精子活力的影响为探讨圆口铜鱼精子活力与渗透压的关系,研究了圆口铜鱼精液渗透压及其精子在2种溶液(NaCl和KCl)7个渗透压梯度(0、50、100、150、200、250、300 mOsm/kg)中的活动情况。结果表明:圆口铜鱼精液渗透压平均为252.48±4.20mOsm/kg;在0~150 mOsm/kg梯度内,受渗透压影响,圆口铜鱼精子快速运动时间和寿命逐渐增加,在150 mOsm/kg NaCl、KCl溶液中,圆口铜鱼精子的快速运动时间分别为35.2 s、30.8 s,寿命分别为103.13 s、105.13 s;在150~300mOsm/kg渗透压梯度内,圆口铜鱼精子快速运动时间和寿命均在不断下降,近似为0。研究结果可为圆口铜鱼精液保存提供参考依据。2.圆口铜鱼精子4℃低温保存分别在Kurokura1、D15、L1、L2、L3、L4六种稀释液中低温保存圆口铜鱼精子,结果表明:精子活率、寿命和运动速度均随保存时间的延长呈下降趋势。未经任何处理的鲜精在保存72 h后,几乎无精子存活。D15稀释液保存圆口铜鱼精子的效果最好,72 h,精子活率为(91.65±6.77)%,快速运动时间和寿命分别为10.00±1.67 s、41.33±7.42 s,观察至120 h,精子活率仍可达(75.28±42.56)%。四种溶液中,精子的VCL、VSL、VAP随时间的延长呈下降趋势。144 h,D15稀释液中精子的VCL、VSL、VAP分别为46.44μm/s、24.55μm/s和32.15μm/s,Kurokura1稀释液中精子已死亡。3.圆口铜鱼精液超低温冷冻技术与效果分析了四种稀释液(D15、D20、L1、D1),三种抗冻保护剂(DMF[二甲基甲酰胺]、DMSO[二甲基亚砜]、METH[甲醇])在三种浓度(7.5%、10%、12.5%,v/v)下对圆口铜鱼精液的冷冻保存效果。结果表明,D1组稀释液的MOT(精子活率)最高,为(74.64±13.17)%,与鲜精无显著差异;抗冻剂终浓度为10%METH组的圆口铜鱼精子,经无离子水激活后,测得MOT最高,达到(78.11±14.74)%,与鲜精差异不显著(P>0.05),精子运动速度达最大,VCL(平均曲线运动速度)、VSL(平均直线速度)、VAP(平均路径速度)分别达到50.28±12.46μm/s、35.06±10.82μm/s、39.44±12.46μm/s,与鲜精有显著差异(P<0.05),抗冻剂DMSO组的精子活率显著低于METH、DMF组;在不同种类不同浓度的抗冻剂保护下,发现10%METH组,相较于使用无离子水激活,用150mOsm/kg NaCl激活后的精子活率和寿命更高,Na~+有延长冻精寿命,提高精子活率的作用。研究表明,D1+10%METH可用于圆口铜鱼精液超低温冷冻保存,为圆口铜鱼的繁育工作和种质资源保护奠定基础。