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花粉壁在植物的生殖发育过程中起很重要的作用,可以使花粉免除外界物理压力并且抵抗不良环境的侵袭。糖份对植物花蜜的产生,种子和花粉发育都是必需的。之前报道,拟南芥RPG1是一个糖转运蛋白,并且影响花粉外壁的发育和早期花序的育性。
本研究利用透射电子显微镜详细地观察rpg1突变体小孢子在四分体时期的发育过程。结果显示:与野生型相比,rpg1突变体的初生外壁基质减少,小孢子质膜不能形成规则的波浪状结构,从而导致孢粉素的不正常沉积,最终引起拟南芥小孢子的外壁模式的缺陷和花粉的降解。在rpg1突变体背景下,四分体周围胼胝质的沉积比野生型少,半定量和定量PCR表明负责胼胝质合成的基因CALS5的表达降低。为了研究rpg1突变体晚期育性恢复的分子机理,我们通过表达谱和序列分析选定了另外一个MtN3/saliva基因家族成员RPG2进行研究.预测显示该基因在花苞和花粉中表达,进一步的原位杂交显示RPG2基因在花药发育过程中有表达。RPG2融合GFP的烟草瞬间转化显示其定位于细胞膜。rpg2单突变的育性与野生型没有差异,而扫描电镜显示rpg2的花粉外壁的网状结构有轻微的缺陷。rpg1rpg2双突变体与rpg1相比育性严重下降,不仅植株种子平均数减少,而且后期的果荚里几乎没有种子产生。这表明和RPG1和RPG2在植株育性方面存在部分冗余,而RPG1在早期的花序中起主要作用。综上所述,我们的结果进一步阐明了rpg1突变体花粉外壁发育缺陷的细节,揭示了MtN3家族基因在初生外壁基质沉积和胼胝质合成过程中的作用。此外还初步解释了雄性不育突变体在生长发育后期育性恢复的机理。