【摘 要】
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目的:研究长链非编码RNA（lncRNA）ANO1-AS1对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法:（1）常规培养食管癌细胞株（EC109、TE）,根据病毒滴度检测最优MOI值,根据MOI值感染ANO1-AS1敲减慢病毒,沉默ANO1-AS1表达组命名为LV-sh-ANO1-AS1,阴性肿瘤对照组为LV-Con,未感染组为空白对照组Blank,感染结束后使用嘌呤霉素进行筛选,筛出稳转
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目的:研究长链非编码RNA（lncRNA）ANO1-AS1对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法:（1）常规培养食管癌细胞株（EC109、TE）,根据病毒滴度检测最优MOI值,根据MOI值感染ANO1-AS1敲减慢病毒,沉默ANO1-AS1表达组命名为LV-sh-ANO1-AS1,阴性肿瘤对照组为LV-Con,未感染组为空白对照组Blank,感染结束后使用嘌呤霉素进行筛选,筛出稳转株。（2）通过q RT-PCR检测各组食管癌细胞中的ANO1-AS1和ANO1的相对表达量。（3）通过划痕实验和TranswellTM迁移实验检测各组食管鳞癌细胞的迁移能力。（4）通过TranswellTM侵袭实验检测各组食管鳞癌细胞的侵袭能力。（5）通过Western blot测定每组细胞中ANO1、基质金属蛋白酶2、9（MMP2、9）、上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transitions,EMT）相关蛋白及ERK/MAPK信号通路相关蛋白的表达。（6）通过mi Rcode和Lnc Base Predicted v.2网站预测lncRNA ANO1-AS1的靶基因。结果:（1）根据慢病毒转染手册感染慢病毒,使用嘌呤霉素筛选3次后,荧光倒置显微镜下观察,两种食管癌细胞系各组细胞转染率均在80%以上。（2）q RT-PCR结果显示,转染ANO1-AS1敲减慢病毒后,食管癌细胞EC109、TE中,LV-sh-ANO1-AS1组细胞lncRNA ANO1-AS1和mRNA ANO1表达水平均低于LV-Con对照组和Blank组（P＜0.05）。（3）细胞划痕实验结果表明,LV-sh-ANO1-AS1组细胞划痕愈合速度低于LV-Con组和Blank组（P＜0.05）。（4）Transwell迁移和侵袭实验结果表明,LV-sh-ANO1-AS1组细胞迁移和侵袭能力低于LV-Con组和Blank组（P＜0.05）。（5）Western blot结果显示LV-sh-ANO1-AS1组MMP2、MMP9、Vimentin、p-ERK1/2及ANO1蛋白表达水平降低（P＜0.05）,E-cadherin蛋白表达水平升高（P＜0.05）。（6）mi Rcode和Lnc Base Predicted v.2网站预测lncRNA ANO1-AS1的靶基因,二者取交集发现mi R-424-5p可能为lncRNA ANO1-AS1的下游靶基因。结论:（1）抑制lncRNA ANO1-AS1的表达可抑制食管鳞癌细胞EC109、TE的迁移和侵袭能力。（2）本研究提示lncRNA ANO1-AS1可能通过调控ERK/MAPK信号通路促进食管鳞癌细胞EC109、TE的迁移、侵袭生物学行为。
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