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目的: 本研究通过临床试验评价尼妥珠单抗、塞来昔布联合放化疗治疗局部晚期鼻咽癌的毒副反应、治疗依从性及疗效,探讨其用于局部晚期鼻咽癌治疗的可行性。通过体外细胞实验,研究尼妥珠单抗、塞来昔布对鼻咽癌细胞株生长、放射敏感性的影响,并观察两种药物对细胞浆、细胞核EGFR信号转导通路的影响,初步探讨其分子机制。再通过检测鼻咽癌肿瘤组织中EGFR的表达情况,分析细胞核EGFR表达在鼻咽癌的临床意义。 方法: 通过Ⅱ期临床试验观察诱导化疗序贯同步放化疗+尼妥珠单抗及诱导化疗序贯放疗+尼妥珠单抗+塞来昔布这两种综合治疗模式治疗局部晚期鼻咽癌的毒副反应及治疗依从性,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析患者生存率。采用MTT法、克隆形成实验观察尼妥珠单抗、塞来昔布单独或联合用药对鼻咽癌细胞CNE1、CNE2的放射增敏作用;采用细胞核蛋白抽提、Western blot技术分析尼妥珠单抗、塞来昔布、X射线照射单独或联合对CNE1、CNE2胞浆、胞核EGFR及其下游信号转导通路的影响。采用免疫组化技术检测鼻咽癌肿瘤组织中 EGFR的表达,利用卡方检验、生存分析中的Kaplan-Meier法和COX回归分析法论证细胞核EGFR表达水平与患者性别、年龄、分期、病理分型及无进展生存期的关系。 结果: (1)DP方案诱导化疗序贯同步放化疗+尼妥珠单抗治疗局部晚期鼻咽癌的Ⅱ期临床试验:共23例患者入组,所有患者均接受了处方剂量的诱导化疗及放射治疗,放疗期间19例(82.6%)患者接受了同步化疗,22例(95.7%)患者接受了≥6周的尼妥珠单抗分子靶向治疗。放疗期间3/4度毒副反应发生率60.9%(14例),其中3/4度口腔粘膜炎发生率34.8%(8例),3/4度中性粒细胞减少发生率26.1%(6例)。中位随访24.1月,2年无进展生存率83.5%,2年总生存率95.0%。 (2)DP方案诱导化疗序贯放疗+尼妥珠单抗+塞来昔布治疗局部晚期鼻咽癌的Ⅱ期临床试验:共31例患者入组,所有患者均接受了处方剂量的诱导化疗及放射治疗,放疗期间所有患者接受了处方剂量的塞来昔布治疗,所有患者接受了≥6周的尼妥珠单抗分子靶向治疗。放疗期间3/4度毒副反应发生率38.7%)(12例),其中3/4度口腔粘膜炎发生率25.8%(8例),3/4度中性粒细胞减少发生率12.9%(4例)。中位随访30.5月,2年无进展生存率89.2%,2年总生存率96.8%。 (3)MTT实验结果显示,塞来昔布在0~200?mol/L浓度范围内,对CNE1、CNE2的细胞毒作用呈时间、浓度依赖性;尼妥珠单抗在0~200?g/ml浓度范围内,对CNE1、CNE2细胞未显示显著细胞毒性。选择25?mol/L塞来昔布(C25)、50?g/ml尼妥珠单抗(N50)处理48h作为后续实验药物浓度及处理时间; (4)克隆形成实验结果显示, C25、N50单独或联合用药对CNE1细胞均未产生显著放射增敏作用;对于CNE2细胞,C25、N50单独用药时有轻度放射增敏作用,但C25、N50联合用药时,CNE2放射敏感性显著提高;CNE2单独照射组的平均致死剂量 D0和准域剂量 Dq分别为1.57Gy和1.90Gy;C25+N50组的平均致死剂量D0和准域剂量Dq分别为1.07Gy和1.20Gy,放射增敏比SER为1.46; (5)Western blot结果显示,N50可使CNE1、CNE2胞浆pEGFR、胞核EGFR表达均降低;C25对CNE1胞浆pEGFR、胞核EGFR表达无显著影响,但可减少CNE2胞核EGFR表达,而对其胞浆pEGFR无显著影响;4Gy X射线照射后,CNE1、CNE2胞浆pEGFR、胞核EGFR表达水平均显著升高。对于CNE1细胞,尼妥珠单抗可抑制4Gy X射线照射引起的胞浆pEGFR及胞核EGFR的升高,但塞来昔布对照射引起的胞浆pEGFR及胞核EGFR的升高均无显著影响。对于CNE2细胞,塞来昔布、尼妥珠单抗单独用药均可以抑制照射引起的胞浆EGFR及其下游信号分子STAT3、AKT、ERK1/2的磷酸化激活,两者联合用药抑制作用更明显;4Gy X射线照射后CNE2胞核 EGFR及其下游分子pDNA-PK表达水平显著升高,塞来昔布、尼妥珠单抗单独用药可以抑制其升高,两者联合用药抑制作用更明显。 (6)免疫组化结果显示,31例鼻咽癌患者细胞核EGFR高表达率为45.2%,统计学分析显示,细胞核EGFR表达水平与患者年龄、性别、T分期、N分期、病理分型及无进展生存期无显著相关性(p>0.05)。 结论: (1)放疗同期联合塞来昔布+尼妥珠单抗的治疗方案毒副反应低,患者治疗依从性好。 (2)4Gy X射线照射可诱导CNE1、CNE2胞浆EGFR磷酸化激活及胞核EGFR表达升高。 (3)尼妥珠单抗、塞来昔布单独或联合用药对CNE1未显示显著放射增敏作用。 (4)尼妥珠单抗、塞来昔布单独用药对CNE2有轻度放射增敏作用,两者联合时CNE2放射敏感性显著提高,其机制可能与胞浆及胞核EGFR信号转导通路的抑制有关。