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免疫抑制剂是一类具有免疫抑制作用的药物,又称为抗排斥药物。目前在临床上主要用于治疗自身免疫性疾病和防止脏器移植排斥。国外对免疫抑制剂的研究自1954年人类第一例同卵双生子间肾脏移植手术取得成功后,医学家在器官移植方面的研究取得了许多重大进展。自20世纪80年代初环孢素A(CsA)应用于临床,器官移植取得巨大成就以来,FK506、MMF又先后获得美国FDA认证并上市。免疫抑制剂在器官移植方面起着越来越重要的作用;免疫抑制剂除了被用来防止器官排斥,也可用来治疗严重的皮肤病如牛皮癣,类风湿关节炎,克罗恩氏病(慢性炎症的消化道)和片状脱发(斑秃)等其他疾病,其中一些疾病属于“自身免疫”性疾病。随着对移植免疫学、分子生物学技术和理论的认识与掌握,人们相继发现并研制出许多新药,其中一些现已进入临床试验及评估阶段。近年来,国内学者也正积极致力于免疫抑制剂的研究与开发。但是由于起步较晚,研发成本较高,目前只有少数几家国内公司涉足,而且主要以仿制国外新药为主。吡美莫司(pimecrolimus)[商品名]Elidel,为新一代免疫抑制类药物。由瑞士诺华公司开发,于2002年在英国率先上市,主要用做免疫抑制药物和特应性皮炎的治疗药物,其作为抗牛皮癣药物和治疗哮喘药物已进入临床二期试验阶段,作为抗关节炎药物和治疗胃肠道炎症药物即将进入临床试验。吡美莫司是大环内酯类抗菌药物子囊霉素(ascomycin, FK520)的一种衍生物,国内目前尚未有厂家生产,因此,研究该药物的合成方法对新药开发具有一定的应用价值。目的1建立从FK506尾液中分离纯化FK506与FK520的方法,得到FK506和FK520的纯品。2以FK520为原料,建立吡美莫司的制备方法,优化合成工艺。3初步建立吡美莫司的含量测定方法并对其异构体现象进行初步研究。方法1建立了FK506与FK520的分离方法,首先对两者的混合溶液进行粗提,除去混合液中的油状物质和其他杂质;然后采用硝酸银硅胶柱层析法分离得到二者的纯品。2以FK520为原料,合成目标产物吡美莫司。2.1①以FK520为原料,采用叔丁基二甲基硅烷基三氟甲烷磺酸酯(TBDMS Trifluoromethanesulfonate)对FK520的C-24和C-33位羟基进行保护,生成Ⅰ;②Ⅰ在对甲基苯磺酸条件下脱去C-33位保护基,生成Ⅱ;③Ⅱ在DMAP催化条件下,经邻硝基苯磺酰氯活化生成Ⅲ;④以氯化锂做氯化试剂,将Ⅲ氯化,生成Ⅳ;⑤Ⅳ在HF酸中水解脱去C-24位保护基,得到目标产物Ⅴ。其中Ⅱ可以不经过活化而直接氯化生成Ⅳ。2.2我们参阅最新文献,发现FK520 C-24位羟基活性较低,可以不必进行特殊保护直接氯化,我们分别采用了三苯基膦与BTC氯化试剂、三苯基膦与NCS氯化试剂和三苯基膦与四氯化碳氯化试剂,取得了理想的结果,并对工艺进行改进,减少了操作步骤,降低了成本,减少了污染。3初步建立了吡美莫司的含量测定方法,并初步考察了吡美莫司的异构现象。结果1成功分离得到了FK506和FK520的纯品,纯度均大于98%。2得到了FK520的衍生物吡美莫司,经核磁共振氢谱、核磁共振碳谱、质谱分析符合其结构特征。对专利文献方法进行了改进,提高了收率,降低了成本;吡美莫司的总收率42.1%,纯度>96%,熔点为135.2-136.1℃,与文献报道相符。3初步确立了吡美莫司的含量测定方法,初步考察了吡美莫司的异构现象。结论1成功分离了FK506和FK520的混合物,所采用的硝酸银硅胶柱层析法分离效果好,两者性质稳定,产品纯度高。2在吡美莫司的制备中,改进了专利方法,同时制备了优良的氯化试剂,尝试多种新型路线,缩短了反应周期,降低了成本,提高产品纯度,并且研究了反应原料的最佳配比。3初步建立了吡美莫司HPLC含量测定方法,初步考察了吡美莫司的异构体情况,为吡美莫司的开发打下了一定基础。