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第一部分 Chi-29b嵌合体在卵巢上皮性癌细胞中的抗癌作用 目的:建立一种可以将miRNA-29b分子通过肿瘤组织特异性转运方式运入肿瘤细胞，进而影响抑癌基因PTEN的重新表达，从而抑制卵巢癌生长的治疗方法。 方法:构建可以靶向结合卵巢癌细胞表面MUC1蛋白的适体和miR-29b构成的嵌合体(Chi-29b)。Dicer酶体外消化Chi-29b，检测Chi-29b能否释放miR-29b。FACS法检测Chi-29b的细胞内化率。Western-blot法检测OVCAR-3细胞中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、PTEN蛋白表达水平，甲基化技术检测OVCAR-3细胞中PTEN启动子区的甲基化，RT-PCR检测OVCAR-3细胞中PTEN mRNA表达水平，Hoechst33342法检测细胞凋亡。 结果:Dicer酶能有效裂解Chi-29b嵌合体，并释放miR-29b。Chi-29b嵌合体可以通过浓度依赖的方式特异性的转运到OVCAR-3细胞中;而且当嵌合体Chi-29b浓度为250nM时，达到细胞内化的高峰拐点(81％)，500nM和1000nM时的Chi-29b内化数量更多。和对照组比较，Chi-29b嵌合体可以显著下调OVCAR-3细胞中DNMT1，DNMT3A，DNMT3B的蛋白表达水平(P＜0.001)，诱导PTEN基因启动子甲基化低表达(P＜0.01)，上调PTEN mRNA和蛋白表达水平(P＜0.001和P＜0.01)，并且可以显著诱导OVCAR-3细胞凋亡(P＜0.001)。 结论:嵌合体Chi-29b能通过MUC1的靶向作用以浓度依赖方式进入OVCAR-3细胞;OVCAR-3细胞中，Chi-29b通过甲基化机制上调PTEN基因和蛋白表达，诱导细胞凋亡。 第二部分卵巢癌中Chi-29b嵌合体的抗化疗耐药效应及机制 目的:确定在卵巢癌移植模型和化疗药物耐药的卵巢癌肿瘤模型中MUC1核酸适体-miR-29b嵌合体的抗肿瘤作用，并进一步探明相关的机制。 方法:构建OVCAR-3-taxol细胞亚株，MTT法检测其IC50值;将OVCAR-3-taxol细胞分别和1mg/ml紫杉醇、500nM的Chi-29b、1mg/ml紫杉醇加500nM的Chi-29b共孵育，MTT法检测细胞增殖。裸鼠右后肢皮下注射OVCAR-3、OVCA-420、OVCAR-3-taxol细胞，建立相应的异种卵巢癌移植动物模型并分组;腹腔注射Chi-29b，评价肿瘤生长情况及其对ALDH1+细胞的影响，甲基化技术检测移植瘤细胞中PTEN启动子的甲基化，RT-PCR法检测PTENmRNA及ALDH1 mRNA表达水平，Western-blot法检测PTEN、MAPK4、MAPK10、IGF1、AKT、Bax及血管动蛋白的蛋白表达水平，Tunnel法检测细胞凋亡水平。 结果:OVCAR-3-taxol细胞亚株的IC50值是5764±143μg/L;Chi-29b嵌合体能显著抑制体外OVCAR-3-taxol细胞增殖(P＜0.001)。在OVCAR-3移植瘤中，和对照组比较，腹腔内注射Chi-29b嵌合体能显著抑制肿瘤生长(p＜0.001)，显著上调PTENmRNA表达(p＜0.001)，显著下调PTEN甲基化和MAPK4、IGF1蛋白的表达水平(p＜0.001);然而在OVCA-420移植瘤中，Chi-29b通过下调MAPK4、MAPK10和IGF1蛋白表达而抑制肿瘤生长(p＜0.01)，但不影响PTEN基因的表达。在OVCAR-3-taxol移植瘤中，和对照组比较，腹腔注射Chi-29b嵌合体能显著抑制肿瘤生长和增加肿瘤细胞凋亡(p＜0.001)，显著上调PTENmRNA、PTEN和Bax蛋白表达水平(p＜0.001)，显著下调Akt、MAPK4、MAPK10和IGF1蛋白表达水平(p＜0.001)。OVCAR-3-taxol移植瘤中的ALDH1mRNA显著高于OVCAR-3移植瘤中的表达水平(p＜0.001);腹腔内注射Chi-29b嵌合体能显著降低这两种移植瘤中的ALDH1mRNA表达水平(p＜0.001)和OVCAR-3-taxol移植瘤中的ALDH1+细胞数(p＜0.001)。 结论:Chi-29b在卵巢癌及卵巢癌耐药的动物模型中均能发挥有效的抗肿瘤作用;卵巢癌耐药细胞的产生和ALDH1阳性细胞增加有关;Chi-29b通过抑制肿瘤干细胞活性发挥抗卵巢癌耐药的作用;Chi-29b通过调节PTEN-Akt-Bax及MAPK和IGF信号途径抑制卵巢癌的生长，并且可能和ALDH1有关。