1.YKL-40在八种肿瘤细胞中的表达及转染LNcap细胞后对其侵袭作用的影响 2.RT-PCR技术检测尿液中survivin mRNA对膀胱癌诊断价值的系统现代企业管理与决策

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目的:检测YKL-40 mRNA在8种肿瘤细胞中的表达水平;研究YKL-40对LNcap细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响,并初步探讨侵袭的作用机制。方法:RT-PCR法检测YKL-40 mRNA在8种肿瘤细胞中的表达情况;扩增重组质粒载体pcDNA3.1-YKL-40,测序鉴定后将其转染前列腺癌LNcap细胞,以pcDNA3.1空质粒载体转染组及未转染空白组为对照;MTT法检测三组细胞的增殖活性;黏附实验和Boyden小室法分别检测细胞黏附、侵袭及迁移能力变化;半定量RT-PCR检测细胞中MMP-2、MMP-7、MMP-9、MT3-MMP、TIMP-1及TIMP-2 mRNA表达水平;明胶酶谱法检测三组细胞培养液中MMP-2和MMP-9酶的分泌及活性水平;体外药物敏感性实验检测转染前后LNcap细胞对5-FU、顺铂、依托泊苷的敏感性变化情况。结果:8种肿瘤细胞中,DU-145和MCF-7细胞表达YKL-40基因,且前者表达水平高于后者(灰度值比分别为1.100、0.433),LNcap等其余六种细胞均不表达;MTT结果显示:pcDNA3.1-YKL-40转染组细胞在第2-6天OD490值均大于两对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05);黏附实验和Boyden小室法检测结果显示:pcDNA3.1-YKL-40转染组细胞的异质性黏附(107.57%)、侵袭(75.11±4.40)及迁移(133.00±5.07)能力均增强(P<0.05),而细胞同质性黏附能力(1322±54、1562±79)降低(P<0.05);半定量RT-PCR结果显示:pcDNA3.1-YKL-40转染组细胞MMP-2、MMP-7、MT3-MMP mRNA表达水平增高(灰度值比分别为0.883±0.031、1.113±0.099、1.139±0.125,P<0.05),而TIMP-1和TIMP-2 mRNA表达水平降低(灰度值比分别为0.225±0.031、0.506±0.047,P<0.05),三组细胞均不表达MMP-9基因;明胶酶谱法测定结果显不:pcDNA3.1-YKL-40转染组细胞培养液中MMP-2酶分泌增多,且活性增强,三组细胞培养液中均无MMP-9分泌;药物敏感性实验结果显示:pcDNA3.1-YKL-40转染组细胞对5-FU、顺铂、依托泊苷的IC50分别是31.15±0.43、4.15±0.13及55.22±0.57μmol/L,均明显高于两对照组(P<0.05)。结论:YKL-40基因在所检测的8种肿瘤细胞中表达具有差异性;将外源性YKL-40转染前列腺癌LNcap细胞后能促进其增殖,降低细胞同质性黏附能力,提高其异质性黏附、侵袭及迁移能力;YKL-40促进LNcap细胞侵袭的分子机制可能是通过增加细胞中MMP-2、MMP-7及MT3-MMP mRNA表达,降低TIMP-1和TIMP-2 mRNA表达,并提高MMP-2酶的分泌和活性,以加快细胞外基质成分的降解。YKL-40还可降低LNcap细胞对5-FU、顺铂及依托泊苷的敏感性。因此,YKL-40可能在肿瘤细胞的恶性转化、局部侵袭过程中具有重要作用,有望成为一个潜在的肿瘤治疗和预后判断靶点。目的:本研究应用系统评价方法对RT-PCR检测尿液中survivin mRNA诊断膀胱癌的文献进行客观评价,以评估其对膀胱癌的诊断价值。方法:计算机检索PubMed、SCI、EMBASE、Cochrane Library、中国期刊全文数据库、中国生物医学文献数据库、中华医学会数字化期刊、中文科技期刊数据库等数据库,并结合Google Scholar等搜索引擎和手工检索,以膀胱肿瘤、生存素、RT-PCR、诊断、敏感度、特异度等为主要检索词,全面搜集1997年到2009年4月关于RT-PCR检测尿液中survivin mRNA诊断膀胱癌的研究;运用诊断性试验的质量评价标准QUADAS (quality assessment of diagnostic accuracy studies)评价纳入文献质量,用RevMan5.0软件检验研究间异质性;提取纳入研究的四格表数据,用Meta-Disc软件计算合并敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比,并进行综合受试者工作曲线(SROC)拟合分析,计算SROC曲线下面积(AUC)。结果:最终纳入26个研究,共2416例。异质性分析结果显示:26个研究间存在高度异质性(P<0.0001,I2=60%)。Meta分析结果显示:与病理检查相比,RT-PCR技术检测尿液中survivin mRNA诊断膀胱癌的准确度指标合并敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比及AUC分别为88%、94%、14.56、0.13、0.9736;按照不同RT-PCR技术进行亚组分析,结果显示:巢式RT-PCR技术检测的敏感度、特异度及SROC曲线下面积最大,分别为91%、95%、0.9805;普通RT-PCR技术检测的敏感度和特异度次之,分别为87%和94%;QRT-PCR技术检测的敏感度(80%)、特异度(93%)最小。结论:RT-PCR技术检测尿液中survivin mRNA诊断膀胱癌与病理检查相比,具有较高的诊断效能。故其可作为膀胱镜检查的主要辅助手段之一,用于膀胱癌的诊断及术后监测。
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