苜蓿总黄酮的提取方法、药效以及多种豆科牧草次生代谢产物的研究

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苜蓿、小冠花、百脉根、红豆草、鹰嘴紫云英、白三叶、黄花草木樨等优质豆科牧草含有丰富的次生代谢产物。本文以这几种豆科牧草为试验材料,对其总黄酮和总皂苷的积累规律进行了研究。同时为充分利用苜蓿中的黄酮类物质,提高苜蓿的经济附加值,分别采用微波和超声波辅助技术提取苜蓿总黄酮,对影响提取量的乙醇浓度、固液比、作用时间、微波功率、超声波温度、提取次数等进行了单因素试验,并在此基础上对各因素的互作效应进行了4因素3水平的正交试验。从而确定了最佳提取工艺,用于生产中提取苜蓿总黄酮。采用柱层析等多种分离手段对苜蓿活性成分进行了分离。并对苜蓿粗提液的药效进行了研究。为建立科学合理的牧刈制度,高效提取天然活性成分,为综合利用优质牧草提供指导依据。研究结果表明:微波辅助技术提取苜蓿总黄酮优选条件为:40%乙醇、1:30固液比,在500W功率下作用60s。这个工艺提取条件温和,温度不超过50℃;节能,耗电量只有0.008千瓦时;省时,提取时间只有超声波法的1/9,冷浸法的1/540;节约有机溶剂,同时无噪音污染。小冠花、百脉根、红豆草、紫云英、草木樨、白三叶6种豆科牧草的总黄酮含量普遍高于甘农3号、新疆大叶、低纤维苜蓿和白花苜蓿;而总皂苷含量整个生育时期均低于苜蓿4个品种。且这几种豆科牧草茎、叶、花、全株中总黄酮和总皂苷含量有极显著差异(P<0.01),在整个生育时期,均为叶片中含量多于茎秆。小冠花、百脉根、红豆草、紫云英、草木樨、白三叶6种豆科牧草可作为提取总黄酮的优质材料;由于其总皂苷含量较低,不会造成家畜臌胀病,可在地上部生物量最高时刈割,用于青饲或调制干草。苜蓿总皂苷含量丰富,是提取皂苷产品的优质材料。对苜蓿中的天然活性物质进行分离,乙酸乙酯层主要含有2-甲叉-3-胆甾烷醇和3,5-二烯豆甾烷两种活性物质。氯仿层主要含有维生素D3活性物质。正丁醇层所含有活性物质种类较多,有6种天然活性成分,分别为芳樟醇、香芹醇、苦杏仁苷、氧化石竹烯、乙酸维生素A和邻苯二甲酸二丁酯。苜蓿提取液具有增强小鼠机体非特异性免疫功能和特异性免疫(体液免疫)功能的作用;体外具有抗菌作用,对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有直接的抑制作用;对血脂具有双向调节作用,低剂量时具有降脂作用,减少了机体产生冠心病的危险,而高剂量时增加了冠心病发生的机率;苜蓿提取液具有抗氧化作用,显著升高机体肝和肾组织的SOD活性,降低MDA的含量。
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