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[目的]探讨灯盏乙素对激活的小胶质细胞极化的影响及MAPKs信号通路对M2型小胶质细胞极化的调控作用,进一步明确灯盏乙素促进激活的M2型小胶质细胞介导的神经营养和保护反应的作用机制。[方法]体外实验采用BV-2小胶质细胞株体外培养,用脂多糖(LPS)激活BV-2细胞,分为对照组、LPS激活组和LPS+灯盏乙素(单体,灯盏花素的主要活性成分,0.54mM)预处理组,共3组。免疫荧光双标染色和Western Blot检测MAPKs相关蛋白(磷酸化和非磷酸化两种状态:p-P38、P38、p-JNK、JNK、p-ERK1/2 和 ERK1/2)及 M2 型小胶质细胞标记物(CD206、Arg1、YM1/2、IL-4和IL-10)的表达变化。并用MAPKs信号通路抑制剂预处理后,检测对照组、LPS激活组和LPS+灯盏乙素预处理组中M2型小胶质细胞标记物Arg1的表达变化。体内实验采用微创开颅电凝法复制大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,随机分为假手术组、MCAO组、MCAO+灯盏乙素组(100mg/kg),共3组(每组n=5),分别于术后1d、3d和7d取材。用荧光双标染色检测各组大鼠大脑皮层M2型小胶质细胞上述标记物及MAPKs信号的上述蛋白表达。用Western Blot技术检测各组大鼠皮层MAPKs信号及M2型小胶质细胞标记物的表达变化。[结果]体外实验结果:①Western Blot结果显示:LPS组CD206、YM1/2、Arg1和IL-10表达明显增高,与对照组比较有显著性差异(p<0.01);使用灯盏乙素干预后CD206、YM1/2、Arg1、IL-10和IL-4表达显著增高;与LPS组比较有显著性差异(p<0.01)。②荧光双标染色结果显示:LPS组CD206、YM1/2、IL-10、BL-4和Arg1表达增强,与对照组比较有统计学意义(p<0.05);使用灯盏乙素干预后CD206、YM1/2、IL-10、IL-4和Arg1在BV-2小胶质细胞的表达明显增强,与LPS组比较有统计学差异(p<0.05)。③荧光双标染色结果显示:LPS组Arg1、p-JNK、p-p38表达增强,与对照组比较有统计学意义(p<0.05);使用灯盏乙素预处理后Arg1表达明显增强,p-JNK和p-p38表达量则明显下降,与LPS组比较有统计学差异(p<0.05)④荧光双标染色结果显示:LPS组Arg1和p-ERK1/2表达增强,与对照组比较有统计学意义(p<0.05);使用灯盏乙素预处理后Arg1表达明显增强,p-ERK1/2表达量同时也明显增加,与LPS组比较有统计学差异(p<0.05)。⑤Western Blot结果显示:在使用灯盏乙素预干预LPS激活的小胶质细胞中,YM1/2、Arg1和IL-10表达明显增高,与LPS激活组比较有显著性差异(p<0.01);在使用灯盏乙素干预前,使用p38抑制剂(SB203580)和 JNK 抑制剂(HY-12041)预处理后,YM1/2、Arg1 和 IL-10 表达明显增高,与灯盏乙素预干预组比较有差异(p<0.01)。⑥Western Blot结果显示:在使用灯盏乙素预干预LPS激活的小胶质细胞中,YM1/2、Arg1和IL-10表达明显增高,与LPS激活组比较有显著性差异(p<0.01);在使用灯盏乙素干预前,使用ERK1/2抑制剂(HY-112287)预处理后,YM1/2、Arg1和IL-10表达明显降低,与灯盏乙素预干预组比较有差异(p<0.01)。(2)体内实验结果:①Western Blot结果显示:在1d MCAO大鼠模型中,MCAO组YM1/2、Arg1和IL-10表达明显增高,与假手术组比较有显著性差异(p<0.01),CD206和IL-4蛋白表达与假手术组比较无明显差异;使用灯盏乙素治疗后YM1/2、Arg1和IL-4表达增高,与MCAO组比较有差异(p<0.05),CD206和IL-10的蛋白表达与MCAO组比较无明显差异;在7d MCAO大鼠模型中,MCAO组CD206、YM1/2、Arg1和IL-10表达明显增高,与假手术组比较有显著性差异(p<0.01),使用灯盏乙素治疗后CD206、YM1/2、Arg1和IL-4表达显著增高;与MCAO组比较有显著差异(p<0.05),IL-10的蛋白表达与MCAO组比较无明显差异;在3d MCAO大鼠模型中,MCAO组CD206、YM1/2、Arg1和IL-10表达明显增高,与假手术组比较有显著性差异(p<0.01);使用灯盏乙素治疗后CD206、YM1/2、Arg1、IL-10和IL-4表达显著增高;与MCAO组比较有显著差异(p<0.01)。②荧光双标染色结果显示:MCAO组CD206、YM1/2、IL-10、IL-4和Arg1表达增强,与假手术组比较有统计学意义(p<0.05);使用灯盏乙素治疗后CD206、YM1/2、IL-10、IL-4和Arg1表达明显增强,与MCAO组比较有统计学差异(p<0.05)。[结论]①CD206、Arg1、YM1/2、IL-4和IL-10在LPS激活的BV-2小胶质细胞和大鼠脑缺血后激活的小胶质细胞高表达中;②使用灯盏乙素干预后明显促进激活的小胶质细胞M2型小胶质细胞标记物CD206、Arg1、YM1/2、IL-4和IL-10的表达。③灯盏乙素可能通过MAPKs信号通路对小胶质细胞的M1/M2型极化发挥调节作用。