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细胞重编程(reprogramming)是指成体细胞通过改变其分化状态,形成包括干细胞在内的不同类型的细胞。Yamanaka和他的团队发现通过过表达四种转录因子,皮肤细胞就能被诱导成多能干细胞,从而把它们命名为诱导多能干细胞(inducedpluripotent stem cells,iPS细胞或iPSCs),这四种转录因子因此被称为Yamanaka因子[1]。通过直接重编程获得的人iPSCs能够用于组织修复和替换,这样避免了免疫排斥和伦理学问题。而且,因为这些细胞能够由取自病人自身的细胞重编程获得,所以有助于在体外建立病人自身的疾病模型和候选药物筛选模型,这一新技术给基于干细胞的个性化治疗和再生医学带来了光明的前景。但是,目前细胞重编程的诱导效率仍然很低。使用肿瘤细胞是否能够提高重编程的诱导效率,以及重编程对肿瘤细胞有何影响,这些问题均有待阐明。本课题通过反转录PCR检测Huh7、SMMC-7721、HepG2等肝癌细胞系中四种Yamanaka因子Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc的mRNA水平,通过Western blot方法检测上述因子在蛋白质水平的表达;应用pLenti6.3/V5Gateway慢病毒系统,构建Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc的慢病毒表达载体;慢病毒载体介导上述转录因子共表达于肝癌细胞系,观察其对细胞状态的影响。实验结果表明,四种Yamanaka因子在肝癌细胞系中均有不同程度表达,mRNA和蛋白质水平的检测结果一致;成功构建了Yamanaka因子的慢病毒表达载体,并包装成为具有感染能力的慢病毒颗粒;慢病毒介导Yamanaka因子在肝癌Huh7等细胞中共表达后,获得了iPS样细胞。上述研究结果提示,通过过表达Yamanaka因子,肿瘤细胞有可能发生重编程,转变为iPS样细胞。在这一过程中,各种Yamanaka因子的相对表达水平对于iPS细胞的诱导非常重要,探讨其中的规律,将为提高iPS细胞的诱导效率提供理论依据。本研究为肝癌细胞来源的iPS细胞的建立,以及通过细胞重编程逆转肝癌的恶性表型提供了实验依据。