实时定量RT-PCR检测多种肝细胞癌和胃癌细胞系MiR-17-92基因簇的表达

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目的miR-17-92为一个高度保守的基因簇,编码miR-17-5p,miR-17-3p,miR-18,miR-19a,miR-20,miR-19b和miR-92-1共七个miRNA,位于人的第13号染色体上C13orf25基因第三内含子区。miR-17-92基因簇参与哺乳动物多个器官发育并与多种实体瘤的发生密切相关。到目前为止,对miR-17-92的研究主要集中在肺癌,尤其是小细胞肺癌和恶性淋巴瘤,对肝胃等消化道恶性肿瘤的研究很少。本研究采用实时定量RT-PCR技术检测多种肝细胞癌和胃癌细胞系miR-17-92基因簇的表达水平,并以正常肝细胞系(L-02)和正常胃粘膜细胞系(GES-1)作为对照,初步探讨miR-17-92基因簇异常表达与肝细胞癌和胃癌发生的关系及其作用。方法培养Be17402,Hep G2肝癌细胞系,L-02正常肝细胞系,AGS, MKN-1, MKN-28, SGC-7901, MKN-45, MGC-803, BGC-823七株胃癌细胞系和GES-1正常胃粘膜细胞系,其中AGS,MKN-1,MKN-28为高分化癌,SGC-7901,MKN-45,MGC-803,BGC-823为低分化癌。待细胞进入对数生长期后,收集约1x105细胞,TRIzol法提取总RNA,反转录后,以DEPC水做空白对照,L-02正常肝细胞系总RNA做阴性对照,HL-60白血病细胞系做阳性对照,运用TaqMan探针实时定量PCR技术检测miR-17-92基因簇在上述各细胞系中的表达情况,应用2-△△Ct法计算miR-17-92基因相对表达量,明确各种肝细胞癌和胃癌细胞系与相应正常细胞系相比表达量差异。结果低分化肝癌细胞系Hep G2 miR-17-92基因簇表达ct值平均值为22.62,高分化肝癌细胞系Be17402 ct值平均值为24.83,其中Hep G2表达量为Be17402的3.86倍。而L-02正常肝细胞系不表达miR-17-92基因簇。与正常胃粘膜细胞系GES-1相比,miR-17-92基因簇在七株胃癌细胞系中的表达均有不同程度的上调,其中低分化株BGC-823表达量最高,为正常胃粘膜细胞系的6.23倍,低分化胃癌细胞系的miR-17-92基因表达相对倍数(4.29±1.36)明显高于高分化胃癌细胞系(1.53±0.28),(p=0.02<0.05)。结论1、miR-17-92基因簇在肝癌及胃癌细胞系中的表达均有不同程度的表达上调,可能参与上述两种常见恶性肿瘤的发生发展过程。2、miR-17-92基因簇的异常表达可能与胃癌分化程度有关。
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