毛竹Mariner-like转座子的转座特性分析

来源 :浙江农林大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:xgf217
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转座子(transposon,Tn),又叫转座因子(transposable element, TEs)、跳跃因子、可移动基因、跳跃基因,是存在于染色体DNA上可自主复制和移位的基本单位,实质是在细胞中能从同一条染色体上的一个位点“跳”到另一个位点,或者从一条染色体转移到另一条染色体上的DNA序列。本研究将之前分离得到的两个具有完整转座酶结构的毛竹MLE转座子Phmar1和Phmar2和与之对应的非自主的转座子Phmar1NA和Phmar2NA构建到带有绿色荧光蛋白基因的植物表达载体pBIN m-gfp5-ER上,然后通过农杆菌介导法对野生型拟南芥进行遗传转化。再对T1代植株进行筛选和鉴定。利用荧光观察和PCR扩增的方法,在确定的转基因植株中发现含有毛竹MLE转座子Phmar1和Phmar2的转基因植株出现了转座现象,而含有非自主转座子Phmar1NA和Phmar2NA的转基因植株则没有。结果表明了毛竹MLE转座子Phmar1和Phmar2是具有转活性的,并且可以在模式植物拟南芥中发生异源转座。再对转基因植株中Phmar1和Phmar2转座子的转座足迹和插入位点进行分析,发现两种转座子都会在转座过程中留下转座足迹,并且会转座到拟南芥基因组的其他位置。再用生物信息学软件对转座足迹序列进行分析,发现Phmar1和Phmar2转座子的剪切过程是不同,从而可以判断这两个转座子的转座特性不同。本研究是首次将竹亚科MLE转座子在拟南芥中进行异源转座,并成功分析了转座特性,为下一步构建高活性毛竹MLE转座子以及开发植物MLE转座子标签系统奠定了基础。
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