癌胚抗原是一种广谱的肿瘤标记物,其在肿瘤早期筛查、肿瘤分期判断、侵袭转移及术后恢复情况评估中具有重要的临床价值。目前针对癌胚抗原的测定多为化学发光检测法和酶联免疫法,化学发光检测成本高且对仪器要求较高,而后者操作繁琐且耗费人工,结果不利于重复,利用胶乳增强免疫比浊法检测血液中癌胚抗原水平,具有成本低、重复性好等优点,具有良好的市场前景。因此,本研究拟采用胶乳增强免疫比浊法开发针对癌胚抗原的体外诊断试剂。首先,本研究将JSR 300nm羧基胶乳微球与Hytest单克隆抗体通过共价偶联法制备免疫胶乳,并系统的研究了偶联过程;用日立7180全自动生化仪进行检测,筛选出胶乳试剂反应体系的最佳条件。结果表明:两株抗体与胶乳微球分别偶联时,活化剂EDC浓度为4%、反应缓冲体系为pH 7.4 PBS缓冲液、偶联时间2 h、JSR300 nm微球2 mg、抗体蛋白量0.4 mg,制备的胶乳试剂具有最佳的灵敏性和线性。该胶乳检测试剂的最佳检测反应条件:检测波长570nm,50μL 0.25%的本研究制备的胶乳试剂、200μL R1、10 μL样本,其中R1含2%NaCl、0.1%表面活性剂、4%PEG6000。其次,本研究通过对胶乳试剂进行TEM扫描、动态光散射扫描及Zeta-电位分析,从微观水平上对免疫胶乳的形态、粒径大小及分布状态、电位等物理性质进行深入研究。电镜结果显示,胶乳微球与抗体蛋白共价偶联后仍可以保持均匀分布状态,没有大量凝聚现象;动态光散射结果表明抗体蛋白稳定偶联在微球表面;Zeta-电位测定结果表明,胶乳微球在与抗体蛋白共价偶联后,仍具有良好的稳定性。最后,对胶乳试剂的一部分性能进行了评价,包括试剂的定标曲线、空白吸光度、线性范围、精密度、分析灵敏度及与化学发光试剂相关性,结果均达到临床检测需求。