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地黄Rehmannia glutinosa Libosch系玄参科地黄属植物,又名地髓,芑等。块根入药,现人工种植,现主产区在山西、河南等省。地黄由于加工炮制方式的不同分为鲜地黄、生地黄和熟地黄,具有清热、抗贫血和滋补等功效。现代科学研究证明地黄主要化学成分为糖类、环烯醚萜类、倍半萜类和苯乙醇苷类,具有降血糖、神经保护等多种生物活性。本论文运用多种色谱技术和波谱技术,并结合化学方法,对鲜地黄进行了系统的化学成分研究,并对其粗提物及单体成分进行了药理活性筛选。从鲜地黄的95%乙醇提取物中共分离鉴(测)定了110个化合物,结构分别为：地黄新苷A-K(1*-11*),jioglutin F (12*),也黄新萜A-F(13*-18*),1,4,5,6-四氢-1-甲基-6-氧代-3-吡啶乙酸(19*),梓醇(20),益母草苷A(21),myopor oside (22),桃叶珊瑚甙(23),单蜜力特苷24),5-deoxyantirrhinoside (25),二氢梓醇(26),myobontioside A (27),3’-O-β-D-glucopyranosyl-catalpol (28),蜜力特苷(29),地黄苷C(30),地黄苷A(31),5-deoxylamiol (32),去乙酰野芝麻苷(33),栀子新苷(34),8-表番木鳖酸(35),栀子酸(36),mussaenosidic acid(37),栀子新苷甲酯(38),栀子苷(39),8-表番木鳖碱(40),jioglutoside B(41),京尼平龙胆双糖苷(42),genipin1-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→6)-β-D-glucopyranoside (43), genameside C (44),6-O-E-feruloyl ajugol (45),6-0-vanillate ajugol (46),6-O-p-hydroxybenzoyl ajugol (47),6-O-(4"-O-α-L-rhamn opyranosyl)vanilloyl ajugol (48),6-oxo-4’-(3-methoxyl-4-hydroxyphenylglycol-8")-feruloyl-ajugol (49-50),6-O-E-caffeoyl ajugol (51),6-0-.sec-hydroxyaeginetoy1ajugol (52), aeginetoyl ajugol5"-O-β-D-quinovoside (53),京尼平(54), jiogl utins D (55),6β-hydroxy-2-oxabicyclo[4.3.0]△8-9-nonen-l-one (56), jioglutins E (57),野菰酸(58), dihydroxy-β-ionone (59), rehmapicrogenin (60), trihydroxy-β-iononem (61), sec-hydroxyaeginetic acid (62), aeginetic acid5-O-β-D-quinov oside (63), neo-rehmannioside (64), dihydrophaseic acid4’-O-β-D-glucopyranosi de (65), rehmaionoside C (66),黑蒴苷(67), rehmaionoside A (68), rehmaion oside B (69), oxyrehmaionoside B (70),地黄苷(71), sculponiside (72),2-phe nylethyl-O-β-D-xylopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside (73),阿克替甙(74),红景天苷(75),leucosceptoside A (76), jionoside D (77), deacyl-martynoside (78), jionosides A1(79), jionosidesB1(80),3,4-dihydroxy-β-phenethyl-O-α-L-rha mnopyranosyl-(1→3)-O-β-D-galacopyranosyl-(1→6)-4-O-caffeoyl-β-D-glucopyrano side (81),香草醛(82),1-(4-methy-2-furanyl)-2-(5-methyl-5-ethenyl-2-tetrahydrof uranyl)-propan-l-one (83),顺式细辛醚(84),丁香酚(85),异丁香酚甲酯(86),阿魏酸(87),苯甲酸(88),丁香酸(89),β-谷甾醇(90),腺苷(91),腺嘌呤(92), rhamnopyranosyl vanilloyl (93), syringicacid-4-O-a-L-rhamnopyranoside (94),2-methoxy-4-methylphenyl-O-β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside (95),葡萄糖(96),半乳糖(97),水苏糖(98),蔗糖(99),甘露三糖(100),棉子糖(101), yemuoside YM1(102-103),(7R,8S,7’R,8’S)-4,9,4’,9’-tetrahydroxy-3,3’-dime thoxy-7,7’-epoxylignan9-O-β-D-glucopyranoside (104),1-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid (105), tachioside (106), isotachioside (107),丙烯酸(108),邻苯二甲酸二丁酯(109)。另外,首次分离得到梓醇苷元(110)。分离得到的110个化合物中,包括51个环烯醚萜(1*-12*,20-57,110),19个单萜、倍半萜和降倍半萜(13*-18*,58-70),10个苯乙醇苷(71-72,74-81)和30个其它类型化合物(19*,73,82-109)。其中化合物1*-19*为19个新化合物。抗肿瘤方面,采用MTT法测定了地黄提取物各部位(图2-4-1)和97个单体化合物对五种人肿瘤细胞的抑制作用。结果显示地黄提取物各部位均无明显的抗肿瘤活性,单体化合物均没有表现出细胞毒活性(IC50>10μM)。保肝和抗肝损伤方面,采用Fe2+-半胱氨酸诱导的肝微粒体脂质过氧化模型,测定地黄部分97个化合物的抗氧化活性。结果显示新化合物5在10-5M时表现一定的抗氧化活性(抑制率=23%)；同时,化合物51,76-77在10-5M也表现一定的抗氧化活性。采用扑热息痛(APAP)引起体外肝细胞损伤的保护模型,测定地黄部分97个化合物的肝保护活性。化合物71-72,74-75,79-80,100在10μM浓度下有一定的保护作用,活性与相同浓度的阳性对照药双环醇相当。以MTT法观察地黄提取物各部位对人肝细胞HL-7702细胞成活率的影响,结果显示,部位1,3,5,10-14有较明显的保肝活性,进一步考察显示化合物11,23,30,34,58,62,68,73,75,90,93,95有明显的保肝活性。抗炎方面,采用给巴豆油致耳部炎症小鼠皮下注射相应受试物(100mg/kg)的方法,显示地黄提取物部位5,10,13,14可较明显的抑制小鼠耳肿胀,显示出一定的抗炎活性。单体化合物可以一定程度上抑制LPS诱导的细胞对NO的生成,与阳性对照地塞米松(浓度10-6M)相比,部分化合物在浓度10-5M显示出一定的活性抗流感病毒方面,与阳性对照扎那米韦相比,地黄部分化合物对抗流感病毒神经氨酸酶均没有显示出活性。镇静催眠和抗溃疡方面,采用戊巴比妥钠协同睡眠模型,小鼠腹腔注射给药测定地黄提取物各部位的镇静催眠作用,以入睡率为评价指标,地黄各部位均显示出一定的镇静催眠作用,但不强,与阳性对照安定相比差太多。采用测定H+-K+-ATP酶活性对地黄提取物各部位的抗溃疡活性进行评价,结果各部位均无明显抑制活性。降血脂方面,地黄提取物各部位对降低甘油三酯活性均无较明显抑制活性。神经保护方面,地黄提取物部位7在1、10μg/ml剂量下对去血清损伤PC12细胞均具有保护作用；部位13在10μg/ml下对鱼藤酮损伤具有保护作用；部位8,12对缺糖缺氧损伤的PC12细胞具有加重损伤作用。进一步测试显示化合物74,77,81和98在10μM浓度下对鱼藤酮损伤细胞具有保护作用。调节钾通道作用方面,利用荧光膜电位法筛选出潜在钾通道阻断剂22个。降血糖方面(体外),地黄提取物各部位对PTP1B酶均无较明显抑制活性。地黄提取物部位1有较明显的醛糖还原酶抑制活性,IC50在3.5μg/ml,化合物74有明显的醛糖还原酶抑制活性,IC50在2.68×10-7μM,其它化合物在浓度10-5μM抑制率均<69.4%。各部位在10μg/ml浓度下对FBPase1均无显著抑制作用,进一步显示各化合物在10μM浓度下对FBPase1均无显著抑制作用。地黄提取物各部位在40μg/ml浓度下对α-葡萄糖苷酶无显著抑制作用,化合物在浓度40μM对α-葡萄糖苷酶抑制率均<32.4%,无明显抑制活性。化合物51,74,77,81在浓度10μM对脂肪酶有明显的抑制活性。地黄提取物各部位对DPP-IV抑制活性均<13.0%,无较明显抑制活性。地黄提取物部位3和部位12对GK激活倍数接近阳性化合物。地黄提取物各部位对PPARy受体的激活倍数均<1.10,无较明显抑制PPARy转录活性。降血糖方面(体内),梓醇在剂量50mg/kg和200mg/kg灌胃给药(每天一次,连续给药)对四氧嘧啶高血糖小鼠血糖在一定程度上有降低作用；腹腔注射(一次给药)对四氧嘧啶高血糖小鼠血糖无明显降低作用(50、200、300mg/kg);在50mg/kg和200mg/kg灌胃给药(每天一次,连续给药)对自发性2型糖尿病KKay小鼠血糖未见明显降低作用。