骨髓细胞移植治疗小鼠急性肝损伤的实验研究

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目的观察骨髓细胞移植对急性肝损伤小鼠肝脏的保护作用,以及移植的骨髓细胞在小鼠肝脏内的转归。方法建立小鼠CCL4急性肝损伤模型,24小时内移植入同种异体小鼠全骨髓细胞,然后检测移植后不同时间肝脏血清转氨酶以及肝脏坏死面积的变化情况;采用免疫荧光双标方法检测肝脏中的骨髓来源肝细胞;采用二步法灌注肝脏,消化分离出骨髓移植后2个月受体小鼠的肝脏细胞进行体外培养,进一步鉴定同时了解其生长发育情况及细胞特性。结果(1)急性肝损伤小鼠接受全骨髓细胞移植后96小时、7天和10天,血清谷丙转氨酶ALT指标较对照组有明显降低;移植后72小时、96小时、7天和10天,血清谷草转氨酶AST指标较对照组有明显降低;移植后72小时和96小时肝脏坏死面积较对照组有明显下降。(2)急性肝损伤小鼠接受全骨髓移植后8周的观察期内:①肝脏中始终存在移植骨髓来源的造血干细胞;②骨髓移植1周后肝脏中开始出现移植骨髓来源的表达AFP的未成熟肝细胞;③骨髓移植4周后开始检测到移植骨髓来源表达ALB的成熟肝细胞,而且此类肝细胞不表达造血干细胞标记CD34。(3)使用2-乙酰氨基芴能显著提高移植骨髓来源未成熟肝细胞的数量,但是不能增加移植骨髓来源成熟肝细胞的数量。(4)分离出的肝细胞中有部分是来源于移植骨髓的绿色荧光细胞,这些细胞培养24小时贴壁后直径平均为24.9±9.2um,能表达AFP,但不表达ALB、Desmin、CD16、CD34;在2周的培养期中,没有见到绿色荧光细胞形成的克隆。结论(1)小鼠急性肝损伤后,骨髓移植能有效促进肝功能血清指标的恢复和肝脏坏死灶的修复,骨髓移植对于急性肝损伤有治疗作用。(2)小鼠急性肝损伤后,移植的骨髓细胞能分化成未成熟肝细胞和成熟肝细胞,这可能是肝脏修复和再生的途径之一。(3)骨髓分化成的肝细胞体外培养不能形成克隆,可能不具备肝脏祖细胞特性。
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